重组鸡痘病毒rFPV-F-VP0实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用.pdfVIP

568蟋》2010年学术年会 T040037 重组鸡痘病毒rFPV-F—VP0实时荧光定量 PCR检测方法的建立和应用 任静强鲁会军 刘燕瑜刘 昊岳云强 刘振江金宁一 (军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春130122) 目的 通过对real-timePCR反应条件的优化，建立重复性好，特异性、敏感性高的标准品和标准曲线。采 用荧光染料SYBRGreen渗入法，定量分析NDV 第1、5、10、15、20代次中的表达情况。 材料方法 病毒的基因组，同时优化荧光定量PCR反应条件，根据病毒FHN和FVP0核酸序列，设计合成特异性引 物，构建制备标准DNA模板。根据优化的PCR条件，分别进行荧光定量PCR扩增。用标准品绘制标准曲 线，根据标准曲线定量计算各代次病毒的拷贝数，分析各代次病毒拷贝数之间的关系。 结果 · DNA为模板，进行荧光定量PCR检测，FPV作为对照。结果显示各代次外源基因的拷贝数均不相同，对 照FPV没有检测到外源基因拷贝数，检测引物TKsFFFKsR在各代次重组毒