USPIO纳米分子探针标记人肺腺癌细胞MRI成像初步的研究.pdfVIP

地降低了膜下平滑肌细胞增殖，但在防治再狭窄方面，中晚期(12周)疗效并不优于无涂层裸支架。 5．支架的低分子肝素涂层对支架的再内皮化无明显影响。6．f氐分子肝素涂层支架防治再狭窄的远期疗 效需进一步观察。 USPIO纳米分子探针标记人肺腺癌细胞MRI成像初步砥究 李康安张锋马勇杰等 上海交通大学附属第一人民医院放射科 近几年，随着分子生物学和影像设备的迅猛发展，医学影像也进入分子影像学时代，可以在细 胞和分子水平活体评价生物学行为的过程¨’。枷R成像因其具有良好的信号敏感性和组织分辨力而 备受推崇，磁性纳米分子探针USPIO也因良好的生物相容性和MR信号敏感性用于离体和活体的生 物学研究，本文对USPIO标记肺腺癌细胞株SPC-A．1的电镜、MRI成像做一初步探讨。 材料与方法 一、试验材料 (Eagle公司)，0．25％胰蛋白酶，胎牛血清。 (Philip公司)，1．5T磁共振仪(GE公司，SIGNA机型) 二、试验方法 1．纳米磁性材料的制备与修饰 3C3H6NH2，在60。C水浴中搅拌反应3小时。然后用离子水洗涤至中性，取适量氨基硅烷纳米颗粒分 散在EMEM培养液(Eagle公司)中，经超声分散后室温保存。 2．细胞培养及超微结构检测 6hr后，弃去培养液，用PBS反复冲洗5遍，彻底冲洗掉细胞表面的Fe304纳米颗粒。分别取培养不 同时间的细胞经0．25％胰蛋白酶消化、离心后，用4％戊二醛固定，4C保存。然后经2％锇酸固定、 梯度酒精脱水、Epon包埋、聚合后用钻石刀切片，经醋酸铀和柠檬酸铅染色后，在高压(75kv)下 对每一代细胞作超微结构观察以重点分析Fe30。纳米颗粒在细胞内的分布状态。 3．磁共振对肺腺癌细胞群的体外成像 85 采用GE公司的SIGNA1．5T磁共振成像系统，眼线圈，轴位和斜冠状位扫描，成像序列SETlWI 300／17ms)，FSET，WI(TR／TE3000／105ms)，FGR／30。(n沂E200／5．0)，视野(FOV) (TRfrE 2。将未标 记细胞，标记细胞用0．25％胰蛋白酶消化、离心后重悬于15ml离心管中，分为标记细胞lXl08个， 管内为培养液对照。细胞悬液的MR成像。 结 果 1．镜下观察：培养lh时，肺腺癌细胞SPCoA．1吞噬行为的细胞超微结构显示少量氨基硅烷Fe304 纳米颗粒进入肺腺癌胞质内并成团簇状分布，随时间延长3h及6后(见图1)，进入细胞质内颗粒 逐渐增多。试验结果还显示纳米颗粒进入细胞后均位于细胞质的溶酶体及吞噬泡内(见图2)，未 见纳米颗粒进入细胞核。经对含有纳米颗粒的SPC．A．1细胞系做进一步传代至第十代，细胞生长良 好并可见有少量氨基硅烷Fe304纳米颗粒均匀地分布于胞浆中。在同～条件下，培养6h后仍未见氨 基硅烷Fe304纳米颗粒进入正常人胚肺细胞。 2．磁共振成像 胞l×108个及做对照的培养液进行矢状和轴位成像。各信号强度测量(见图3)。信号强度变化率 SPC-A—l细胞和未标记SPC-A．1细胞信号的强度。在sE TlWI、FSET2WI和FGR／30。三个序列中， -72％。四个序列中FGR／30的信号强度变化最大，FSET2W1次之，SE T1WI变化最小。IXl08个 标记细胞在四个序列中信号强度变化均大于5×107个标记细胞(见图4，5)。 讨 论 研究活体干细胞的标记和示踪成像成为当今分子影像学的前沿课题，而肿瘤的磁性纳米颗粒的 标记和示踪尚少见报道。本试验在这方面做了初步的尝试，现介绍如下。 养1h时，可见成簇的纳米颗粒进人肺腺癌细胞内，并随着培养时间的延长进入癌细胞的纳米Fe304 明显增多。正常细胞WI-38在6h的培养时间内却没有吞