mRNA差异显示技术及其在园艺植物上及应用.pdfVIP

中国园艺学会热带南亚热带果树分会第二届学术研讨会暨全国龙眼产业发展论坛论文集 187 mRNA差异显示技术及其在园艺植物上的应用 刘凯1‘2曾继吾1夏瑞1 黄永红1 陈金印2 易干军1 (1广东省农业科学院果树研究所，广东广州510640；2江西农业大学农学院，江西南昌330045) 摘要：mRNA差异显示技术是鉴别基因差异表达方法之一，已在生物技术相关领域中广泛应用。本文介 绍了mRNA差异显示技术的概况、基本原理及主要优缺点，比较详细地练透了该技术在园艺植物生物技术方 面的最新应用情况和取得的研究结果。 关键词：mRNA差异显示技术(mENADD—PCR)；园艺植物 differential mRNA差别显示技术(mRNAdisplay，mRNA of ferendal reverse Display Transcriptional 者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。由于每一种组织细胞(包括同一组织细胞经过不同的 处理)都有特异表达的基因谱，即持异的RNA指绞图谱，该技术已广泛应用于分离鉴定组织特异性表 达的基因。 A的特性，用特定的锚定引物 两位美国科学家(1992年)根据高等生物成熟的mRNA都带有poly 反转录后，进行PCR扩增，建立了mRNA差别显示技术，并应用差异显示技术对比人类乳腺癌细胞与 正常乳腺上皮细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所特有的基因【21。差异显示技术为寻找新基因 开辟了捷径，是该领域的重大突破，目前广泛已应用于生物技术各个领域，如农业【3J、植物HJ、动 物‘51、医学陋】、菌类1等，涉及了基因诱导表达，杂种优势机理，植物抗逆性，发育分子机理，基因 克隆等方面的研究，已成功地分离到了数百种基因，成为当前分离编码产物未知目的基因的一种十分 快速而有效的方法(图1)。 ■妄墨4旦lq3厶弓蕾o￡3Z 图l 使用不同方法克隆差异基因的文章发表情况 1 mRNA差异显示技术的概述 1，1 mRNA差异显示技术的原理 l 88 中国园艺学会热带南亚热带果树分会第二届学术研讨会暨全国龙眼产业发展论坛论文集 regu— lated gene)，以其时空特异性表达模式完成个体正常的生长、发育与分化…。这种在生物个体发育的 不同阶段，或是在不同的组织或细胞中发生的不同基因按时间、空间进行有序的表达方式，叫做差别 基因表达(differential geneexpress)，它是细胞分化的基础。在真核生物细胞中约含有lO万个基因，仅 约10％～15％的基因在细胞中表达，而且不同发育阶段、不同生理状态和不同类型的细胞中表达的 基因也不尽相同。基因的差异性表达不仅是细胞形态和功能多样性的根本原因，而且也是各种生理及 病变过程的物质基础，因此分离、鉴定差异表达的基因具有重要的意义。mRNA差别显示技术正是对 组织特异性表达的基因进行分离的一种快速而行之有效的方法，是一种比较不同细胞系、不同组织问， 或同一细胞系、同一组织不同条件下基因表达差异的技术方法。 mRNA差异显示技术是在逆转录反应PCR反应和聚丙烯酰胺凝胶电泳这三项技术的基础上发展起 来的。迄今为止，除了极少数的情况(如组蛋白基因mRNA)之外，所有的真核生物基因mRNA分子 这种引物我们通常叫做3’一端锚定引物，一般由11或者12个连续的脱氧胸苷酸和髓个3’一端锚定脱 l 氧核苷酸组成，用oligo(dT)1 类亚群，然后根据57一端设计的随机引物(理想长度是lO个核苷酸)和其中一个锚定引物配对组成引 物对．对由这个锚定引物反转录的第一链cDNA进行RT—PCR扩增。一般由12种37一端锚定引物和 20种5 DNA，每一条都代表