贝类奥尔森派琴虫可视化LAMP检测技术的建立应用.pdfVIP

贝类奥尔森派琴虫可视化LAMP检测技术的建立与应用 庞耀珊 谢芝勋 谢丽基 谢志勤 邓显文刘加波 彭宜 范晴 (作者单位：530001南宁，广西壮族自治区兽医研究所／广西畜禽疫苗新技术重点实验室) S核糖体RNA olseni)的5．8 【摘要】根据环介导等温扩增(LAMP)技术原理，针对奥尔森派琴虫(Perkinsus 两条环引物LF和LB。通过对反应条件的优化，建立了一种适用于贝类奥尔森派琴虫的可视化LAMP检测技术。该 技术只对奥尔森派琴虫发生扩增反应，产生黄绿色荧光扩增产物，对其他对照DNA样品无扩增反应，不产生黄绿色 荧光。对F3和B3外引物扩增产物进行测序分析，其序列与GenBank中奥尔森派琴虫序列一致，检测结果具有高度 特异性。对奥尔森派琴虫质粒DNA的最低检测量为100fg。用该项LAMP技术与OIE公布的派琴虫PCR检测技术 分别对50份分别来自华东及华南沿海地区的牡蛎样品进行检测，同时对PCR阳性样品进行测序分析。结果LAMP 检测到2份奥尔森派琴虫，PCR方法检测到9份派琴虫。测序分析结果表明。PCR方法检测到的9份派琴虫阳性样 品中有2份为奥尔森派琴虫，其结果与LAMP检测结果相符，说明该技术适用于贝类样品奥尔森派琴虫的检测。 I关键词】派琴虫；贝类；LAMP；荧光反应；检测 and ofvisualLAMPonPerkinsusolseniPANGYao-shan，XIE application assay Development Zhi-xun*．XIE Xian—wen．LIUJia-bo，PENGYi，FANGQingCruangxiVeterinary Li-fi．XIEZhi-qin．DENG Research LaboratoryVaccinesandNew 530001，China Institute，GuangxiKey ofAnimal Technology，Nanning to mediatedisothermal were specificprimers [Abstract]ObjeefiveAccordingloop amplification(L脚)assay，6 ontheconservedbetween5．8SribosomalRNAandintemaltranscribed2onthe DNA based designed region spacer genomic ofPerkinsusolseni．Thesewereincludedonesetofouter F3and setofinner FIPand primers primers B3，one primers BIP， as andavisualLAMPmethodwas onesetof LFandLB well．Thereactionconditionswere looPprimers optimized tlle Perkinsus olseniLAMPmethodcouldbe Perkinsus establishedfor detectionof otseni．n圮Perkins