单细胞凝胶电泳在猪精子质量检测上及应用.pdfVIP

A “格拉姆杯”提高母猪年生产力暨第四届全国猪人工授精关键技术研讨会g黝 从而切断传播到健康猪的途径，同时也使环境得到净化。定期对猪舍地面、墙壁、设施及用具 进行消毒，并保持舍内空气流通，避免或减少病原微生物污染环境，使猪群生活在安全的环境 之中。消毒是控制和扑灭传染病很重要的措施之一。 2．4．2加强粪尿、病死猪管理 对正常猪的粪、尿发酵或沼气处理，对患病猪的粪尿、乳、流产的胎儿、胎衣、羊水及病 死猪进行焚烧等无害化处理。 2．4．3消灭鼠、蝇、蚊传播媒介，严防狗、猫、飞鸟等其他动物进入栏舍 2．5坚持自繁自养 养猪场(户)应坚持自繁自养、全进全出、封闭式饲养管理制，强化饲料营养，喂全价优 质料，细化各类猪群饲养管理，应特别注意繁殖母猪和仔猪的养护。减少各种应激因素对猪群 的影响。 上述几种防控措施是相互关连的，单靠疫苗消灭不了传染病，因此只有认真执行综合防控 措施，才能达到有效控制和扑灭传染病引起的母猪繁殖障碍病。 单细胞凝胶电泳在猪精子质量检测上的应用 李兆华‘张树敏张志斌赵晓东金鑫李娜 (吉林省农业科学院畜牧分院吉林长春130000) 摘要：单细胞凝胶电泳是一种在单细胞水平上检测DNA单、双链断裂的方法，与传统DNA损伤检测方法相比， SCGE具有简便、快速、经济、灵敏，并无需放射性标记、所需细胞少等优点，适合于体内、外不同类型实验和 各种类型细胞DNA损伤的研究。该方法广泛应用于DNA修复、遗传毒理、环境监测和细胞凋亡的研究。本文对 彗星试验的发展、原理、方法及其在在猪精子质量检测上的应用等方面进行了综述。 关键词：猪精子；单细胞电泳；DNA损伤 cell assay)， 单细胞凝胶电泳(singlegel 是一种在单细胞水平上检测DNA单、双链断裂的方法。从理论上讲，该方法适用于所有有核细 +作者简介：李兆华，男，36岁，博士，副研究员，研究方向：动物遗传育种与繁殖， Emai izhaohua@163． l：nkyl ，、 g黝论文集 胞，能够灵敏的检测单链和双链DNA的断裂，在检测诱变剂、射线等对DNA的损伤，监测环 境污染物对机体的遗传损害，研究毒物致癌机制等有广泛的应用价值。与传统DNA损伤检测方 法相比，SCGE具有简便、快速、经济、灵敏，并无需放射性标记、所需细胞少等优点，适合于 体内、外不同类型实验和各种类型细胞DNA损伤的研究。因此，SCGE技术在近几年取得了很 大的发展和广泛的应用。 1 SCGE的发展 在碱性条件下使DNA解螺旋，中和后用吖啶橙染色，用光度计测定绿光(表明双链损伤)与红 光(表明单链损伤)强度，用二者之比来测定损伤程度，但由于处理过程要求十分严格，故该 糖凝胶中，铺于载玻片上，在去污剂和高盐溶液中溶解，然后在中性条件下电泳，溴乙啶染色 后，用荧光光度计测定。Olivet3】对上述方法进行了改进，采用了较严格的溶解条件，使中性SCGE 年，Singh[4】等提出在碱性条件下进行单细胞凝胶电泳，检测SSBs和碱性不稳定位点，完善了 in sire 等首次将SCGE技术与DNA荧光原位杂交技术(fluorescence 步提高了损伤DNA分析的灵敏度。 2检测机理 单细胞凝胶电泳用于检测有核细胞DNA损伤的技术，可在单个细胞水平上检测DNA损伤 和修复。其基本原理是：在细胞裂解液的作用下，有核细胞的生物膜破坏，使细胞内的DNA、 蛋白质及其他成分进入凝胶，继而扩散到裂解液中，唯核DNA仍附着在剩余的核骨架上而留在 原位。DNA解螺旋后进行电泳，如细胞未受损伤，则核DNA断片较少，片段较大，电泳时DNA 因其分子质量大而停留在核基质中，经荧光染色后呈圆形的荧光团无拖尾现象；若细胞受损， DNA断片较多，在碱性条件下DNA解螺旋变为单链，电泳时因DNA分子量小可以进入凝胶中， 向阳极伸展，荧光显微镜下呈一个亮的头部和尾部，形似彗星，故又称彗星实验。DNA