云母颗粒对大鼠乙酸性溃疡性结肠炎的实验的研究.pdfVIP

云母颗粒对大鼠乙酸性溃疡性结肠炎的实验研究 钦丹萍 邓辉邵国民任永葆韩建新 浙江省中医医院 溃疡性结肠炎(UlcerativeColitis，UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种病因尚未明确 的慢性疾病。中药云母为鳞状片状天然矿石，为含钾、镁、铝的硅酸盐化合物，云母颗粒是经高科 技深加工而成的新剂型，我们前期的研究已证明云母具有良好的胃肠粘膜保护作用。现通过建立乙 酸灌肠所致的大鼠UC模型，观察云母颗粒灌肠对UC大鼠结肠粘膜的保护作用，同时从血中TGF 131、TXB2角度探讨其可能的作用机制。报告如下： 1．材料与方法 1．1实验动物 SPF级SD大鼠，体重180～2209，雄性，购自中科院上海实验动物中心，标准饲料饲养于浙江 中医学院实验动物中心。 1．2药物和试剂 云母粉：39；袋，江苏江阴中药厂制剂，浙江省中医院中药房提供：必奇(蒙脱石散剂)：3∥袋， l： 海南先声药业有限公司：冰醋酸：分析纯，500ml／瓶，杭州化学试剂有限公司；转化生长因子13 晶美生物有限公司；血栓素B2：解放军总医院科技开发中心放免所。 1．3实验仪器 电子分析天平：上海天平仪器厂；BH体视显微镜：北京泰克仪器有限公司；自动匀浆机：苏州 Leica公司。 1．4实验方法 1．4．1 分组 健康SD大鼠108只，随机分为6组，分别为云母高剂量组、云母中剂量组、云母低剂量组、 必奇组、模型对照组、空白对照组，每组动物均为18只。 1．4．2造模方法 至结肠腔内67cm，9％乙酸2ml灌肠，20秒后立即用生理盐水5ml冲洗。 1．4．3给药方法 造模成功后3小时，按组别不同分别给予7ml不同浓度的药物或生理盐水灌肠，以后每天早上 一次，连续14天。 1．4．4药物剂量 云母高、中、低剂量组分别以云母颗粒灌肠(以生理盐水稀释至悬浮液)，剂量分别为0．729／lOOg、 水灌肠。 1．5观察指标 造模后的第三天处死8只大鼠，第十四天处死剩余大鼠。取大鼠血和结肠组织观察以下指标： 1．5．1 结肠粘膜损伤指数(CMDI)0级：无损伤：1级：轻度充血水肿，表面光滑，无糜烂 或溃疡；2级：充血水肿，粘膜粗糙，呈颗粒状，有糜烂或肠粘连；3级：高度充血水肿，表面有坏 ．．一288．．～ 死及溃疡形成，其面积lcm，肠壁增厚或表面有坏死及炎性息肉；4级：重度充血水肿，表面有坏 死及溃疡形成，其面积lem。或全肠壁坏死。 1．5．2光镜病理评分0级：正常；1：充血水肿，少许炎性细胞浸润；2级：浅表糜烂，粘膜 及粘膜下层广泛充血、水肿、炎性细胞浸润；3级：隐窝脓肿，粘膜层坏死及溃疡形成，加2病变： 4级：粘膜层及粘膜下层坏死，溃疡深达粘膜下层或肌层，加2、3病变。 1．5．3扫描电镜每组随机取两只大鼠，距肛门约5cm处，剪取环周一圈长度约lcm的结肠组 织，生理盐水冲洗3次，2．5％戊二醛溶液固定，在扫描电镜下观察结肠粘膜表面的病理学改变。 1．5．4血清1℃F口1取大鼠血5ml，40C离，心后取上清液，--200C保存至测定。采用酶联免疫 吸附法(ELISA)测定，在紫外分光光度仪上读取OD值，参照《医用统计学》浓度与光密度值关 系【公式：Y=a+blgx(Y为光密度值，x为浓度)】换算，在电子表格Excel中完成浓度计算。 1．6统计方法 采用SPSSl2．0软件统计包进行统计分析，各组计量资料用均数±标准差表示，组间资料用单因 素方差分析，均数间两两比较采用t检验，等级资料采用秩和检验。 2．结果 2．1 结肠粘膜损伤指数(CMDI)和光镜病理评分 第十四天，云母高、中剂量组CMDI评分均明显低于模型对照组(Po．05)，同时云母高剂量组与 空白对照组无差异(PO．05)。光镜病理评分：第三天云母高剂量组光镜病理评分明显低于模型对照 组(Po．05)，第十四天，各云母治疗组明显低于模型对照组(P0．05)。 2．2扫描电镜 第三天模型对照大鼠结肠粘膜表面正常结构基本消失，溃疡形成，高倍镜下可见上皮表面微绒 毛粘连、松散或脱落，第十四天模型对照组大鼠结肠粘膜表面上皮细胞呈片状脱落，杯状细胞丢失。 粘膜表面溃疡形成，高倍镜下可见上皮表面微绒毛粘连、脱落。第十四天各云母治