棉花种子特异性启动子的克隆及表达载体构建.pdfVIP

花 学 报 Cotton Science 20 11 23 渊5 冤院427~432 花种子特异性启动子的克隆及表达载体构建 明玉 陆才瑞 邹长松 王巧莲 宋国立* 中国农业科学院棉花研究所/ 农业部棉花遗传改良重点实验室袁河南安阳455000冤 摘要院种子特异性表达启动子是植物种子基因工程改良的重要工具遥 Lea(Late embryogenesis abundant) 蛋白是 胚胎发育后期种子 大量积累的一系列蛋白质袁因此袁其调控序列可能提供一个很好来源的种子特异性表达 启动子遥 为研究植物Lea 蛋白基因启动子在种子 的特异性表达袁本研究通过PCR 扩增袁从亚洲棉 L. 冤石系亚1 号中克隆了Lea 蛋白基因家族 113 基因上游1262 bp 的调控序列和 34 基因上 游1445 bp 的调控序列遥 DNA 序列分 结果表明袁克隆到的两个片段与已报道的Lea 蛋白基因同一家族该基 因的对应序列的相似性分别达到97.43 %和94.27 % 遥 分别用限制性内切酶 和 I 双酶切重组质粒 pGEMT-D 和改造后的表达载体pBI121-T 袁分别回收pGEMT-D 重组质粒中的小片段和pBI121-T 植物表达载 体 的大片段袁经连接尧转化和鉴定袁获得由 113 基因启动子和 34 基因启动子驱动报告基因 的新型 植物表达载体pBI121- 113尧pBI121- 34 袁为外源基因在棉花种子中的定位表达研究奠定基础遥 关键词院Lea 蛋白曰 113 基因启动子曰 34 基因启动子曰启动子分 曰表达载体 中图分类号院S562.035.3 文献标志码院A 文章编号院1002-7807 渊20 11冤05-0427-06 QI Ming-yu, LU Cai-rui, ZOU Chang-song, WANG Qiao-lian, SONG Guo-li* ( 455000, ) In order to study the expression of late embryogenesis abundant gene in cotton seeds, the 1262 bp 5 忆flanking sequence of 113 gene and the 1450 bp 5 忆flanking sequence of 34 gene were cloned by PCR from L. The similari- ty of cloned 113 gene promoter and 34 gene promoter compared with the sequence of Lea protein gene family which had been reported earlier were 97.43% and 94.27% respectively. Two new plant expression vectors named pBI121- 113 and pBI121- 34 in which the reporter gene is drived by 113 and 34 gene promoter were constructed after cutting two vec- tors pGEMT-D and pBI121-T with two restric