实验十一酶的特性.docVIP

实验十一 酶的特性 目的 进一步理解酶的有关性质，如温度对酶活力的影响、pH值对酶活力的影响、酶的激活与抑制及酶的专一性。 一、温度对酶活力的影响 原理 酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最快。大多数动物酶的最适反应温度为37～40℃，植物酶的最适反应温度为50～60℃。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关，有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快完全失去活性。通常低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 器材 ①试管及试管架。 ②恒温水浴。 ③冰浴。 ④沸水浴。 试剂 ①含0.3％氯化钠的0.2％淀粉溶液：需新鲜配制。 ②稀释200倍的唾液：用蒸馏水漱口，以清除食物残渣。再含一口蒸馏水，30s后使其流入量筒并稀释200倍(稀释倍数可根据各人唾液酶活性调整)，混匀备用。 ③碘化钾-碘溶液：碘化钾20g及碘10g溶于100ml水中，使用前稀释10倍。 操作 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 取3支试管，编号后按下表加入试剂，摇匀后，将1号、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号管内液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10min后，再用碘液实验，结果如何? 表 温度对酶活影响实验操 二、pH值对酶活性的影响 原理 酶的活力受反应溶液中pH值的影响极为显著，不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH值对唾液淀粉酶活性的影响。 器材 ①试管及试管架。 ②移液管。 ③滴管。 ④50ml锥形瓶。 ⑤恒温水浴。 试剂 ①新配制的溶于0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液。 ②稀释200倍的新鲜唾液。 ③0.2mol／L磷酸氢二钠溶液。 ④0.1mol／L柠檬酸溶液。 ⑤碘化钾-碘溶液。 ⑥pH试纸：pH5～8范围的试纸。 操作 取4个标号的50ml锥形瓶。用移液管按下表添加0.2mol／L磷酸氢二钠溶液和0.1mol／L柠檬酸溶液以制备pH5～8的4种缓冲液。 表 pH对酶活影响实验操作 从4个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入4支带有标号的试管中，随后于每个试管中添加0.5％淀粉溶液2ml和稀释200倍的唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37℃恒温水浴中保温。 第4管加入唾液2min后，每隔1min由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加1～2滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔，从第一管起，亦均为观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH值对唾液淀粉酶活性的影响，并指出唾液淀粉酶的最适pH值。 三、唾液淀粉酶的活化和抑制 原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。 器材 ①恒温水浴。 ②试管及试管架。 试剂 ①0.1％淀粉溶液。 ②稀释200倍的新鲜唾液。 ③1％氯化钠溶液。 ④1％硫酸铜溶液。 ⑤1％硫酸钠溶液。 ⑥碘化钾-碘溶液。 操作 按下表准备4支试管并依次加入各种试剂，反应后观察结果并记录。 表 唾液淀粉酶活化剂抑制实验的操作和结果记录