应用栀子苷灌胃建立小鼠肝损伤模型的初步的研究.pdfVIP

应用栀子苷灌胃建立小鼠肝损伤模型的初步研究 禄保平1贾睿2 1．河南中医学院肝病研究所，河南郑州450008；2．郑州市中小学卫生保健站，河南郑州450000 【摘要】目的：探索应用栀子苷灌胃建立小鼠肝损伤模型，并从过氧化损伤分析其机制。方法：先以不同剂量栀子 苷连续灌胃7d，检测小鼠血清ALT、AST水平及肝指数，并进行光镜观察，探索导致明显肝损伤的相对合适剂量； 观察，探索导致明显肝损伤的相对合适时问；最后以相对合适剂量栀子苷灌胃相对合适时间，观察小鼠肝组织MDA、 数显著升高，肝细胞出现明显病理改变，尤以30和45倍剂量明显：应用30倍剂量栀子苷灌胃7d后，小鼠血清ALT、 剂量栀子苷灌胃7d可造成小鼠肝损伤模型，自由基脂质过氧化可能没有参与栀予苷诱导的肝损伤。 【关键词1药物性肝损伤；栀子苷；动物模型：MDA；GSH．Px 栀子系常用的清热药物和药食两用之品，具有抗炎、抗氧化、利胆、利尿、抗肿瘤、解热、镇 痛、辐射防护、降血脂等多种药理活性…。栀予苷为其主要药效成分，具有保肝解毒、消炎利胆、 降血糖、抗炎、抗肿瘤等功效托删。然而，近年来随着人们对药物不良反应的日益重视，不少文献报 道栀子(栀子苷)具有肝毒性H刊。为预防本药的不良反应，并为中药致肝损伤的基础研究提供新的 动物模型，课题组探索应用栀子苷灌胃建立小鼠肝损伤模型，观察了给药后小鼠肝功能、肝组织形 态学及肝匀浆MDA、GSH—Px的变化，现总结如下。 1材料与方法 1．1动物昆明种清洁级小鼠，体重18’229，雌雄各半，购自河南省实验动物中心，许可证号 动物中心。 1．2 药物与试剂 栀子苷709，提率2％，纯度95％，陕西信瑞生物科技有限公司生产，批号 生物工程研究所提供。 1．3 主要仪器 电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产；台式小型高速离心机、台 式多功能高速冷冻离心机，德国希格玛离心机有限公司生产；单道可调精密移液器，法国吉尔森公 利达实验室设备公司生产；TU一1901紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产； 国莱卡公司生产。 1．4分组与给药先以50只小鼠随机分为空白组，栀子苷正常剂量、15倍剂量、30倍剂量、45 基金来源：河南省高校科技创新人才支持计划项目(2009HASTIT009) 383 按0．2mL·10旷1体重栀子苷水溶液灌胃；空白组给予等体积蒸馏水灌胃。每日1次，连续7d，末次 给药后禁食18h处死，以探索栀子苷致明显肝损伤的相对合适剂量。再以50只小鼠随机分为栀子 苷给药组40只、空白组10只。以探索出的相对合适剂量栀子苷水溶液灌胃，每日1次，灌胃4d、 7d、10d、14d后各处死10只，处死前禁食18h：空白组给予等体积蒸馏水灌胃，以确定致明显肝 损伤的相对合适时间，并探索可能的机制。 颈椎脱臼处死，迅速摘取肝脏，漂洗、拭干，用万分之一电子天平称重，并于肝右侧最厚一叶，切 观察病理学改变。余肝组织用电子天平精确称取0．59，加4．5mL冷生理盐水，制成10％肝组织匀浆， 用考马斯亮蓝法测定，肝匀浆MDA及GSH—Px分别采用硫代巴比妥酸法和二硫代二硝基苯甲酸比色 法测定。 1．6统计学处理采用SPSSl6．0软件包进行统计，计量资料运用单因素方差分析和成组t检验， 多重比较用方差分析中多样本两两比较的LSD检验，成组}检验方差不齐用芒’检验。计数资料采用 秩和检验。 2结果 2．1不同剂量栀子苷对小鼠血清ALT、AST活性及肝指数的影响见表l。 表1 不同剂量栀子苷对小鼠血清ALT、AST及肝指数的影响(元±s，n=10) 注：宰与空白组比较PO．05。 正常剂量栀子苷对小鼠血清ALT、AST及肝指数无明显影响，与空白组比较无显著差异 之间肝指数无显著差异(P0．05)。 2．2不同剂量栀子苷对小鼠肝组织形态学的影响 2．2．1组织形态学变化空白组及正常剂量组小鼠肝细胞、肝细胞索、肝窦均无异常改变；15倍剂 量组肝细胞可见轻重不等的水样变性，小叶中央区较重，偶见气球样变的肝细胞，肝窦变窄；30倍 剂量组肝细胞呈弥漫水样变性，小叶中央区重，可见气球样变的肝细胞，肝窦变窄甚至消失；45倍 剂量组肝细胞呈弥漫水样变性，小叶中央区重，可见肝细胞气球样变及点状坏死，肝窦变窄甚至消 失。 2．2．2细胞变性的半定量分析从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，分别记录每个视野中