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枣分子标记的研究进展 133 枣分子标记的研究进展 齐靖1申连英1毛永民H宋仁平2 (1河北农业大学中国枣研究中心，保定071001：。保定师范专科学校，保定071000) 摘要：本文对分子标记在枣种质资源和遗传育种上的应用进展进行了综述，并对当前枣分子标记 研究存在的问题及解决对策进行了分析。 关键词：分子标记；枣；种质资源；遗传育种 分子标记是以生物的大分子，尤其是生物体内的遗传物质——_DNA的多态性为基础的遗 片段长度多态性(Restrictionfragmentlength chain DNA分子标记具有不可比拟的优越性，它的应用范围越来越广。 枣是我国特有的经济树种，我国枣树资源非常丰富。自20世纪50年代以来，我国果树 工作者对我国枣资源进行了大规模调查，基本摸清了我国现有的枣树资源。DNA分子标记技 术给枣遗传育种研究工作带来了巨大的便利，目前已成功应用于枣品种鉴定、遗传多样性检 测、QTL分析和遗传图谱构建等诸多领域。本文综述了近年来分子标记技术在枣树研究中的 应用进展及存在的问题，并展望了分子标记技术在枣树研究中的应用前景。 1用于枣遗传研究的分子标记技术 分子标记技术在枣研究中应用起步较晚，目前在枣上应用的DNA分子标记技术主要有 RAPD(RandompolymorphicDNA)和AFLP(Amplifiedfragmentlength amplified polymorphism)，下面对这两种技术进行简单介绍。 1．1队PD 右)作为PCR的反应引物，对基因组DNA进行扩增，由扩增产物的多态性而显示基因组的 多态性的检测技术12]。RAPD是一种基于序列的多态性，由于可以在没有任何分子生物学研 究基础的情况下对某一物种进行遗传多样性的研究，相对其他标记来说经济简便，DNA用量 少(ng级)，而且避免使用放射性物质，自创立以来，已广泛用于基因定位、遗传图谱构建和 遗传多样性分析等领域，是一种应用前景广泛的分子标记方法。因而近年来在果树品种资源 authorfor ’通讯作者The corrcspondenc；mym63@126．net。 134 干果研究进展(4) 鉴定及其它方面得到了广泛的应用【3J。国外从1993年就开始将RAPD技术用于果树研究中吲， 现已成功应用于葡萄‘51、苹果16]、柑橘【7】、杏嘲、柿【91等较高经济价值的果树中，一般认为通 过RAPD分析可以达到对果树不同种质资源进行鉴定和分类的要求，具有一定可靠性pJ。 然而RAPD技术也有其不足，首先RAPD提供的是显性标记，它不能区分同一位点扩增 的片断是纯合还是杂合的；其次，RAPD再现性差，需要对不同物种做大量的摸索工作，以 确定每一物种的最佳引物和反应条件。只有反应条件标准化才能提高RAPD标记的再现性。 1．2AFLP 它克服了RFLP技术复杂、RAPD稳定性较差的缺点，又兼具两者之长。具有稳定性强、分 辨率高的特点，被认为是一种较为理想的、高效的分子标记技术【101。目前已广泛应用到农作 物、林业和园艺作物的研究中。 AFLP技术的基本原理是通过对基因组DNA的限制性酶切片段进行选择性扩增而揭示 其多态性。首先将基因组DNA经限制性内切酶双酶切后，形成长度不等的限制性酶切片段， 然后连上接头形成带接头的特异性片段，作为PCR扩增的模板。用与接头配对但3’端有几 个选择性碱基的引物对特异性片段扩增，只有那些与引物的选择性碱基严格配对的DNA片 段才能被扩增出来。扩增产物最终经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。 AFLP技术提供的显性或共显性标记。不仅具有多态性高、重复性好的优点，而且还有 DNA用样量少，不需预先知道基因组DNA的序列等特征等优点。缺点是试验程序复杂，对 模板反应迟钝，谱带可能发生错配与缺失，技术要求苛刻，成本较高。 2分子标记在枣上的应用 目前，分子标记主要应用在枣树种质资源和分子辅助育种研究方面。 2．1品种鉴定 我国枣树栽培历史悠久，种植资源丰富，枣的品