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牛病毒性腹泻病毒实时定量RT_PCR检测技术的建立及初步应用.pdf
4 Journal ofAnmi al Science andVeterinaryMedicine Vol. 29 No. 5 2010
RT- PCR
1 1,* 1 1 1 2 1 1
, , , , , , ,
( 1. , 832003; 2. )
: 以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因 5 - 非编码区为参考, 设计优化一对特异的荧
光定量 PCR 物, 应用 Smart Cycle分析系统, 结合 va Green荧光染料结合原理,建立一种快速
1 6
定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量 PCR 技术该方法线形范围为 10 ~ 10 copies/L, 相关系
2 2
数为R = 0. 997, 扩增效率为 = 0. 78灵敏性比常规 PCR高 10 倍该方法具有良好的特异性,
检测变异系数低于 1%应用本实验建立的方法检测 25份不同地区采集的临床症状疑似 BVDV
感染的牛粪样品, 阳性检出率为 72% ( 18/25), 与病毒分离培养和电检观察相比, 该方法具有快速
灵敏特异重复性好和能定量检测等优点, 为实验室快速准确检测 BVDV奠定了基础
: 牛病毒性腹泻病毒; 实时定量 RT- PCR; 检测
[] S852. 653 [] A [] 2010)
Establishment and InitialApplication of aRealtime Fluorescent
Quantitative PCRMethod forDetection ofBovineViralDiarrhea Virus
1 1* 1 1 1
R N Y an, CH N Chuangfu , QIAO Jun,WANG Pengyan , SH NG Jinliang ,
2 1 1
WANG Yuanzhi, ZHANG Zhan, LI Zhen
( 1. C ollege of A n mi al S cience and Technology, Sh ih ez i University, Sh ih ez i X inj iang 832003, C hina; 2. C ollege of M ed icine, Sh ihez i Un iversity
Abstract: The ami of this study was to develop a vaG reen realtmi e quantitative PCR which can detect Bovine viraldiarrhea vi
rus ( BVDV ) quickly and flexibly. A ccording to genome sequencesw ithin5UTR of BVDV published in GenBank, a pair of prmi ersw as
2
designed. The assay had a dependent coefficient R = 0. 997, amplified efficiency = 0. 78 and detection sensibility is 100 tmi es than
conventionalPC
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