检测鸭瘟病毒PCR方法的建立及其在临床诊断和免疫和致病机理研究中的初步应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物徽生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 检测鸭瘟病毒PCR方法的建立及其在临床诊断 和免疫与致病机理研究中的初步应用+ 程安春，汪铭书．刘菲，宋涌，袁桂萍．韩晓英，徐超，廖永洪 4) (四川农业大学动物科技学院禽病研究中心，四川， 雅安，62501 根据Genbank文献，用计算机分析并合成了l对用于扩增鸭瘟病毒(DuckPlague I基因的246．266 Virus，DPV)ECORI基因765bp片段的引物，上游引物(P1)位于ECOR 位，下游引物(P2)位于ECORI基因的727．744位，以DPVCHa株DNA为模板，筛 选最佳反应条件和试剂工作浓度，建立了检测DPV的PCR方法。应用该方法对DPV强 毒株鸭胚培养物和弱毒株鸡胚培养物进行基因扩增，均可获得498bp的特异性DNA片段， 而对正常鸭(鸡)胚和鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、 多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌进行检测，结果均呈 阴性，没有出现交叉反应，对扩增产物进行测序的结果与文献报道的一致，证明PCR扩 增产物与方法的特异性。对DPVCHa株鸡胚毒提取物DNA进行检测，其最低检出量为 对所获得的结果进行x2分析．证明PCR检出率明显高于前2种方法。CHa株免疫雏鸭 后对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、 小脑、舌头、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果表明①皮下接种后4h 心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑阳性，8h全部19种组织阳 性；②口服接种后4h舌头和食道阳性，8h心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、 小脑、舌头、食道和血液阳性；③滴鼻接种后4h无阳性组织，8h后可在心、肝、脾、肾、 胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液阳性；④三种免疫途径的鸭从12h至第21 天均能所有采组织中检测出DPV DNA。DPV强毒SCl株人工感染成年鸭2小时后即能 够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出DPVDNA。12小时后及其死亡鸭均可从心脏、 肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食道、 腺胃、血液、舌头、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等20种组织器官中检测到DPV的 DNA。研究表明建立的PCR可用于鸭瘟的快速诊断和分子流行病学调查，实验结果对阐 明鸭瘟弱毒的免疫机理和强毒的致病机理提供了重要的实验数据。 关键词：PCR检测鸭瘟弱毒及强毒株免疫及致病机理 鸭瘟病毒(Duck Plague virus，DPV)是引起的鸭、鹅等水禽的急性败血性传染病的一 种疱疹病毒，临床以体温升高，两腿麻痹、下痢、流泪和部分病鸭头颈肿大为特征。该 病为一种广泛嗜全身性感染的传染病．其病理特征是血管损伤，体腔出血，消化道出血、 ’基金项目：四川省杰出青年学科带头人基金后续赞助项目(编号：0320026—028】 作者简介：程安春(1965一)，男．贵州省长顺县人，博士，教授．博士生导师，从事动物传染病教学 和研究工作．E-malt：Anchun@Sicau．educn；Tel：0835-2885544／2882754(Fax)： 233 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 炎症和坏死，淋巴器官受损以及实质器官的退行性变化。Baudet(1923)首先报道了荷兰 的家鸭暴发了鸭瘟后，现在世界各养鸭国家和地区均有该病的发生和流行，其发病率和 死亡率都很高，是危害养鸭业的最为严重的传染病之--[n“。由于DPV与其他许多病原引 起的疾病在临床上有相似之处，特别是有细菌性或病毒性继发或混合感染是，更增加了，临 床诊断工作的难度，因此仅根据流行病学和临床特点很难作出诊断．确诊需要借助实验室 技术。目前实验室诊断检测DPV的