乳腺浸润性导管癌中DLIA的表达及其与血管生成的关系.pdfVIP

临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2013Jan；29(1) ·93 · 乳腺浸润性导管癌中DLIA的表达及其与血管生成的关系 郎志强 ，吴艳秋 ，蔡 莉 ，姚卫东 ，郝俊梅 ，于国华 摘要：目的 探讨浸润性导管癌 (invasiveductalcarcinoma， 腺组织、IDCI一Ⅲ级各 10例用于半定量 RT—PCR实验。 IDC)中DLIA的表达及其与血管生成的关系。方法 采用 1．2 试剂 (1)免疫组化试剂：DLIA购 自Abeam公司(兔 免疫组化 BenchMark(R)XT一步法检测 122例 IDC 中 抗人多克隆抗体)，其余抗体购 自北京中杉金桥公司。(2) DLL4、CD34／D2-40的表达，分析其表达与临床病理特征的 RNA提取试剂盒：RNAisoPlus购 自Takara公司(D9108A) 关系，探讨DLL4与血管生成的关系。同时应用半定量 RT— (TianweiCorporation，Beijing，China)。RT—PCR相关试剂： PCR技术检测 IDCI一Ⅲ级 中DLL4的mRNA含量。结果 AMV酶、AMVBuffer购于 Promega公司 (cat：M5101)，oli． 122例 IDC中DLL4的阳性率为74．6％(91／122)，在 IDC godT15及所有引物均由上海生工公司合成，Taq酶、10×PCR I～Ⅲ级中的阳性率分别为48．5％ (16／33)、75％(30／40)、 Buffer、dNTPMixture(各2．5Ixmol／L)、6×lodingBuffer购自 91．8％(45／49)，三者 间表达差异有统计学意义 (P均 Takara公司(cat：DR001A)，DL20OODNAMarker购于 Takara 0．05)。DLIA的表达与IDC患者肿瘤大小、临床分期及淋巴 公司(cat：D501A)。 结转移呈正相关 (P均 0．05)，与患者年龄 、ER、PR及 1．3 方法 HER一2表达无相关性 (P均 0．05)。DLL4阳性肿瘤的微血 1．3．1 免疫组化染色 免疫组化染色采用罗氏公司 Bench— 管密度 (microvesseldensity，MVD)值为 (28．3956±11．848 Mark(R)XT全 自动免疫组化机一步法。PBS替代一抗作为 0)~ ／HPF，阴性者 MVD值则为 (14．1290±8．8572)个 ／ 阴性对照。DAB显色，中性树胶封固。 HPF，两者表达差异有统计学意义(t=6．139，P=0．000)。 1．3．2 半定量 RT．PCR实验 将各级别 IDC组织及正常乳 结论 DLL4的表达与乳腺癌的恶性程度及预后密切相关 ， 腺组织用Trizol法提取总 RNA，测OD值，并根据OD值计算 在肿瘤血管生成过程中起重要作用。 出RNA的含量。分别取上述各组的总 RNA2Ixg，按逆转录 关键词：乳腺肿瘤；微血管密度；DLL4；PCR；免疫组织化学 试剂盒说明合成第一链 cDNA，将所得 cDNA行半定量PCR 中图分类号：R737．9 文献标志码 ：B 扩增，以GAPDH作为内参。DLL4引物序列上游5-AACT- 文章编号：1001—7399(2013)01—0093—03 GCCCITCAAITYCACCT-3，下游 引 物：5-GCTGG1-ITI’GCT— CATCCAATAA一3。GAPDH 上游引物：5-CCATGCCAATCT— 血管生成是影响肿瘤生长的重要因素，抑制肿瘤血管生 CATCTr一3；下 游 引 物：5-CGTGACA1TrAAGGAGAAG-3。 成是抗肿瘤治疗的重要方法之一。多项研究显示 ，DLL4参 PCR反应条件为：94℃预变性 10min；94℃30S，58℃30S， 与正常胚胎及肿瘤组织的血管生成，决定内皮细胞的增殖与 72℃ 30S，循环28次；72℃延伸 10min。扩增产