2.2菌种的选育鉴定.pptVIP

第二节 工业微生物菌种的选育和鉴定 菌种获得 从菌种保藏机构直接购买所需的菌株 从自然界分离筛选 从生产过程中发酵水平高的批号中重新进行分离筛选 国内菌种保藏机构 国外菌种保藏机构 菌种选育 菌种选育工作大幅度提高了微生物发酵的产量，促进了微生物发酵工业的迅速发展。 通过菌种选育，抗生素、氨基酸、维生素、药用酶等产物的发酵产量提高了几十倍、几百倍、甚至几千倍。 菌种选育在提高产品质量、增加品种、改善工艺条件和产生菌的遗传学研究等方面也发挥了重大作用。 菌种选育的目的是改良菌种的特性，使其符合工业生产的要求。 一、自然选育 在生产过程中，不经过人工诱变处理，根据菌种的自发突变而进行菌种筛选的过程，叫做自然选育或自然分离。 自然选育： 从自然界分离获得菌株 根据菌种的自发突变进行筛选而获得菌种。 1. 从自然界分离获得菌株 样品采集 样品预处理 目的菌富集培养 菌种初筛 菌种复筛 菌种发酵性能鉴定 菌种保藏 采样 样品来源要广泛 微生物代谢特点和生产目的相结合 考虑微生物的生理类型 土壤样品：有机质含量和通风状况，pH，水分，季节，地理条件等 预处理 物理法：热处理、膜过滤、离心等 化学法：添加几丁质的培养基 诱饵法：花粉、毛发等 纯种分离 施加选择性压力分离法 控制培养时的氧气、温度、pH、盐浓度、碳源等 添加抗生素 2. 从自发突变体中获得菌株 变异是育种的基础。 自然突变是指自然条件下出现的基因变化。 自发突变的频率较低，因此自然选育筛选出来的菌种，不能满足育种工作的需要。因而不能仅停留在“选”种，还要进行“育”种。如通过诱变剂处理菌株，就可以大大提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，从中选出具有优良特性的变异菌株——诱变育种。 二、菌种鉴定 1、经典分类鉴定方法 形态学特征 生理生化特征 血清学试验和噬菌体分型 2、现代分类鉴定方法 （1）微生物遗传型鉴定 DNA 碱基组成（G+C mol%）分析 DNA-DNA杂交 rRNA同源性分析 以DNA为基础的分型方法 2、现代分类鉴定方法 （2）细胞化学成分特征分类法 细胞壁的化学组成 全细胞水解液的糖型和氨基酸类型 分支菌酸分析 脂肪酸组成及磷脂成分分析 醌类的分析 可溶性蛋白的质谱分析 * * 1）普通微生物菌种保藏中心：中科院微生物研究所 2）农业微生物保藏管理中心：中国农科院 3）工业微生物保藏管理中心：中国食品发酵工业研究院 4）医药微生物保藏管理中心： 5）兽医微生物保藏管理中心：农业部兽医微生物研究所 6）CCTCC: Chinese Centre for Type Cultures Collections, Wuhan University, Wuhan, Hubei, 430072, China. 细菌：卫生部 真菌：中国医科院皮肤病研究所（南京） 病毒：中国医科院病毒所 新抗生素：四川抗生素工业研究所 生产用抗生素：华北制药厂 1）美国典型菌种收藏馆（ATCC） 2）美国农业研究服务处菌种收藏馆 3）英国国立标准菌种贮藏所： 4）法国巴斯德研究所：教学科研免费 5）德国微生物和细胞收藏所 6）日本微生物菌种保藏联合会（JFCC） 不承担鉴定业务，工业菌种收费保藏，教学科研菌种免费供应 不收集不能形成冻干保存的菌种 马杜拉放线菌、小双孢菌，小四孢菌，孢囊链霉菌 土壤 100～120℃干热，1 h 马杜拉放线菌 土壤 100℃干热，15 min 高温放线菌 土壤 55℃干热，10 d 小单孢菌、链霉菌、红球菌、嗜酸放线菌和嗜碱放线菌等 水、土壤、粪便 55℃，6 min 链霉菌 土壤、植物根 40℃，2～16 h 分离的放线菌 样品 处理条件 分离前样品加热处理 随机分离方法 生化诱导分析法（BIA）-λ诱导检测法-将大肠杆菌的lacZ基因连接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，诱发λ阻遏蛋白CI分解，PL启动子启动lacZ基因转录，测定表达的β-半乳糖苷酶活性来检测能损伤DNA的抗肿瘤药物的存在。 分离培养基 合成培养基——精氨酸培养基，高氏合成一号培养基，天门冬素培养基，察氏培养基等 有机培养基——Waksman培养基，Bennett培养基 几丁质培养基——只有放线菌能够利用几丁质，生长的菌落小，白色，需转接到产可溶性色素的适当培养基上加以区分 HV培养基——以土壤腐殖质为唯一碳源和氮源的培养基 总的要求：尽量使样品中的全部放线菌都生长出来，而其他微生物（细菌和真菌）又尽可能不长。 抑制剂的使用 加入抗真菌试剂（制霉菌素、两性霉素B、放线菌酮、丙酸钠以及使真菌形成较小菌落的rose bengal等），抑制真菌生长； 加入抗细菌抗生素（青霉素、链霉素）抑制细菌生长，增加放线菌的分出率； 加入某些抗生素也可抑制部分放线菌，有利于分离到一