CLC-3基因在宫颈癌中的表达及临床意义.pdfVIP

CLC-3 基因在宫颈癌中的表达及临床意义1 李威，董莹莹，武昕 中国医科大学附属第一医院妇科，沈阳（110001 ） E-mail ：xinwu.1964@ 摘 要：目的探讨容量调控性氯离子通道（CLC-3 ）在子宫颈癌组织中的表达及临床意义。 方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR ）方法检测60 例宫颈癌组织，10 例经放化疗前后 的宫颈癌组织，10 例正常宫颈组织中的CLC-3mRNA 的表达情况。结果 CLC-3mRNA 在正 常宫颈组织中的表达的灰度值的比值为0.6912 与宫颈癌组织中的2.3937 相比，有显著性差 异（P0.01 ）。CLC-3mRNA 在高分化癌中表达为 1.3187、中分化为1.5718，与低分化的4.5899 相比，有显著性差异（P0.05 ）。CLC-3mRNA 在宫颈癌 Ⅰ- Ⅱ期中表达为1.0842，在宫颈癌 Ⅲ-Ⅳ期表达为3.5688 ，两者有显著性差异（P0.01 ）。CLC-3 基因在放化疗前的宫颈癌组织 中表达为1.5198 与放化疗后的0.2237 相比，有显著性差异 (P0.01 ）。结论 CLC-3 基因参 与宫颈癌细胞恶性增殖过程。CLC-3 与宫颈癌的恶性进展有关、与宫颈癌的临床分期及病理 分级呈正相关。宫颈癌放化疗可降低CLC-3 基因的表达。 关键词：CLC-3 ，宫颈癌 宫颈癌是发展中国家妇女最常见的恶性肿瘤,其发病率占女性生殖器官恶性肿瘤的首 位，是危害妇女健康及生命的主要疾病，目前研究认为宫颈癌与人乳头状瘤病毒（HPV ）感 染有关，然而并不是说一旦感染HPV 就注定发展为宫颈癌，提示有其他辅助因素共同参与 宫颈癌的发病病理机制。氯离子通道是细胞的主要阴离子通道，在细胞膜电位，调节细胞跨 上皮转运，维持胞内pH 值及在细胞容积调节等方面氯通道都发挥重要的作用, ClC-3 属电压 门控氯离子通道，但其又有容积调控氯通道的部分特性，近年的研究发现：ClC-3 在细胞周 期的调控，细胞凋亡，细胞黏附，细胞动力学方面都有一定的作用，在人宫颈癌细胞系中高 增殖细胞的ClC-3 氯通道基因表达明显大于静止期细胞[1] 。在宫颈癌活体组织中的表达情况 尚不清楚。本研究目的是探讨ClC-3 mRNA 的表达与宫颈癌变的关系。 1. 材料与方法 1.1 研究对象 取自中国医科大学附属第一医院妇科2005 年6 月至2007 年9 月宫颈活检和手术切除之 标本,宫颈癌60 例,入院接受放化疗的 10 例，术前液基细胞检测正常，术后病理证实为正常 宫颈组织标本10 例（注：取自子宫肌瘤行子宫全切除术后的标本）。将这些新鲜组织贮存于 液氮中冷冻，4 小时后再转入-70℃低温冰箱保存。收集宫颈癌患者的临床病理资料进行统 计学分析,包括:⑴年龄：以40 岁为界分为两组，≤40 岁及〉40 岁；⑵采用国际妇科联盟（FIGO ） 分期标准：Ⅰ- Ⅱ期36 例，Ⅲ-Ⅳ期24 例；⑶组织分化程度：高分化12 例，中分化37 例， 低分化 11 例；⑷病理类型：宫颈鳞癌51 例，宫颈腺癌9 例；⑸治疗前后：同一患者未经放 射治疗及放疗两周配对，共 10 对。 1.2 主要试剂 1本课题得到辽宁省教育厅高等学校科研项目（项目名称：宫颈癌放、化疗的疗效与离子通道状态的相关性 研究。批准）的资助。 - 1 - RNAiso Reagent(Total RNA 提取试剂) ，TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver3.0 〔宝生物工程（大 连）有限公司〕，CLC-3 及β-actin 上游及下游特异性引物由日本TaKaRa 公司合成。 1.3 方法 1.总RNA 提取：宫颈组织约50-100mg，利用RNAiso Reagent(Total RNA 提取试剂)完 成总RNA 提取，并用紫外分光光度计检测RNA 浓度及纯度，-700 冰箱保存。 2 、cDNA 的合成：反转录反应液：Mgcl 2 2 µl， 10 ×缓