荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌.pdfVIP

临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2014Mar；30(3) ·321· 网络 出版时间：2014—3—2513：06 网络 出版地址 ：http：／／www．enki．net／kems／doi／10．13315／j．cnki．cjcep．2014．03．025．html 荧光定量 PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌 杨长绍，王 丽，潘鑫艳，王 力，黎贵芸，杨举伦 摘要：目的 改进石蜡组织的处理 ，提高结核分枝杆菌在石 随着分子生物学技术的发展 ，结核分枝杆菌的检测方法 蜡组织中检测的敏感性。方法 选择荧光定量PCR检测石 不断增多，敏感性也在不断提高，其中荧光定量PCR技术是 蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本，行 HE 目前石蜡组织中检测结核分枝杆菌最敏感的方法之一，且操 染色、抗酸染色及荧光定量 PCR石蜡组织结核分枝杆菌 作简单，结果易判读。但其也存在一定的缺陷与不足，如模 DNA检测。通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择 板DNA质量、浓度以及实验操作不当均会严重影响扩增结 干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量 果，出现假阴性或假阳性 ，特别是当检测值处于临界值时会 的多种方法，对比其在荧光定量 PCR法中的检出率。结果 造成结果难以判读。本文旨在通过石蜡组织选材、组织修片 各实验组 ct值减小，扩增 曲线均有不同程度的升高。结 以及PCR模板量等方面加 以改进和质量控制，以提高荧光 论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的 定量PCR检测结核分枝杆菌的敏感性和准确性。 敏感度。 关键词：结核分枝杆菌 ；荧光定量PCR；石蜡组织 1 材料与方法 中图分类号：R521 文献标志码：B 1．1 材料 选取2012年 l2月 ～2013年6月成都军区昆明 文章编号：1001—7399(2014)03—0321—03 总医院诊治的结核石蜡标本20例 (石蜡组织结核分枝杆菌 doi：10．13315／j．cnki．cjcep．2014．03．025 荧光定量PCR检测结果ct值为37～40时，以肉芽肿为主要 组织学改变，并均已被病理确诊为结核)及肺腺癌、肺组织慢 性炎标本各5例。荧光定量 PCR仪 (CFX96)购 自美国Bio— 收稿 日期：2013—08—21 Rad公司，微量紫外分光光度计 (NanoDrop2000)购 自美国 基金项 目：国家 自然科学基金 (青年基金、云南省应用基 Thermo公司，结核分枝杆菌核酸检测试剂盒及 QIAampDNA 础研究面上项 目(2012FB210) FFPETissueKit(福尔马林固定、石蜡包埋组织、基因组 DNA 作者单位：成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032 提取试剂盒)，均购 自QIAGEN公司。 作 者 简介：杨 长 绍，男，技 士。Tel：(0871E—mail： yangehangshao@ 126．eom 1．2 方法 样本分组：20例临界值标本分为 4组 ，每