几种植物组织总RNA提取方法的特点及疑难对策24754.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2009，37(18)：8341—8342 责任编辑 常俊香 责任校对 施倩倩 几种植物组织总 RNA提取方法的特点及疑难对策 杨占军 ，谷守琴 ，张健 (1．准阴师范学院生物系，江苏淮安2233o0；2．保定学院生物系，河北保定o710o0) 摘要 植物组织总RNA的提取方法较多，在提取过程 中会遇到酚类物质、多糖和蛋 白质的干扰及外源RNase污染等 问题 ，笔者对几种 植物组织总RNA提取方法的特点、提取过程遇到的问题及解决问题的对策进行 了简要介绍。 关键词 植物组织；RNA；提取方法 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)18—08341—02 CharacteristicsofSeveralExtractionMethodsonTotalRNA inPlantTissuesandStrategiestoProblems YANGZhan．junetal (BiologyDepartmentofHuaiyinNormalCollege，Huaian，Jiangsu223300) Abstract ThereweremanyextractionmethodsontotalRNA inplanttissuesandmoreproblemsinextractionprocess．suchastheinterfer— enceofphenoliccompounds．polysacchafidesandproteinandthepollutionofRNase．Theauthorbrieflyintroducedthecharactefisticsofsev． eralextractionmehtodsontotalRNA inplanttissues．theproblemsinextractionprocessandthestrategiestoproblems． KeYwords Planttissues：RNA：Extractionmethods 植物组织总 RNA的提取是分子生物学研究的基础 ，在 用无水 乙醇或异丙醇沉淀总核酸 。然后再选择性地分离 进行Northern杂交分析、基因体外翻译、cDNA文库构建、cD． 出RNA。 NA末端快速扩增 (RACE)、差异显示反转录 PCR(DDRT． 1．4 热硼酸法 及改良热硼酸法 该技术将硼酸缓冲体 PCR)等研究时均需要高质量的RNA。但植物组织RNA的 系、蛋白酶 K消化蛋白和氯化锂选择性沉淀 RNA等步骤偶 提取较动物和微生物困难 ，原因是植物具有坚硬的细胞壁， 联在一起。硼酸可与酚类化合物依靠氢键形成复合物、二硫 同时富含多种次生代谢物，如多糖、多酚、蛋 白质等。细胞破 苏糖醇(DTT)作为还原剂，聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)可与多酚 碎后，这些物质会以不同方式干扰 RNA的提取，如酚类物质 化合物形成复合体，这几种物质都可抑制植物组织中酚类物 氧化后可使 RNA活性丧失，多糖可形成难溶胶状物质与 质的氧化及其与RNA的结合 ，通过 沉淀剩余的酚类物 RNA一起被沉淀…。另外，植物细胞破碎后，细胞内的RNA 质，从而使其与RNA分开。因此，该技术非常适合于富含酚 酶(RNaSe)以及操作体系中的RNase均会降解分离组分中 类物质的植物组织中总RNA的提取。改 良热硼酸法不需要 的mRNA，且RNase极为稳定，在试验操作中很难将其彻底 苯酚／氯仿／异戊醇法 的抽提步骤 ，大大简化 了RNA的提取 除去。因此 ，熟悉各种RNA提取方法的特点、了解提取过程 过程。 中可能出现的问题并掌握解决疑难问题的对策是保证试验 1．5 植物组织总RNA提取试剂盒 许多公司根据科研需 成功的重要一环。 要研制出一些提取 RNA的试剂或试剂盒 ，可根据需要进行 1 几种常用的植物组织总 RNA提取方法及特点 选择。以下为部分国外、国内试剂公司提供的植物组织总 1．1 强变性剂法 通常采用异硫氢酸胍法或盐酸胍法提取