HIV_1多表位膜蛋白在E_coli中的表达和在血清检测中的应用_韩保光.pdfVIP

1998 3 22 1 8 Bull Acad Mil Med Sci, M ar 1998; Vol 22No 1 HIV-1 E .coli * 北京基础医学研究所　北京　100850 : 获得具有较多保守抗原表位的HIV-1 膜重组抗原, 提高HIV 筛选ELISA 试剂的质 量。:利用分子克隆 方法, 获得了新的 -1 膜重组抗原的基因克隆, 编码 120 端 PCR HIV gp C 亲水区37 个氨基酸残基( 482 ～518) 以及 41 膜外部分的128 个氨基酸残基( 548 ～675) 。 env gp env 将该基因克隆到p EMEX-1载体上融合表达,表达蛋白经纯化后, 以1 Lg/ ml 的浓度包被ELISA 板,用来检测卫生部药品生物制品检定所提供的HIV-1标准血清。:在大肠杆菌中有效表达了 新的重组HIV-1 膜抗原,表达产物以包涵体的形式存在, 提取包涵体后,通过制备电泳将重组蛋白 纯化。单独使用该抗原建立的间接ELISA 分析, 可以检测出标准血清中所有的11份阳性血清; 而 标准血清中的28份阴性血清均无交叉反应。:重组膜抗原由于含盖了HIV 膜抗原的主要表 位, 是HIV-1ELISA 筛选分析的良好试剂。 人类免疫缺陷病毒1型; 膜蛋白; 基因表达; 抗原优势表位 R512. 91 -1 Novel recombinant env proteinof HIV withmultiple immunodominant : . epitopes its expression in E coli and application as reagents for sero- logical tests H an B aog uang , M e ng L i , M a X iankai , Song X iaog uo, Wang H ongy an , L ing S hig an Beijing Institute of Basic Medical Sciences, Beijing 100850 AbstractObjective: To express novel recombinant HIV-1 env antigen containing multiple con- served epitopes in E . coli in order to provide good reagents for HIV-1 screening ELISA of high . : 37 - 120 quality Methods A DNA fragment encoding aa from C terminal hydrophilic region of gp (env 482- 518) and 128 aa from ectodomain of gp41 (548- 675) was obtained by PCR and other cloning method, and cloned into p EMEX-1for expression in E .c oli . T he fusion protein was ex- pressed purified and coated at concentration of l Lg ml on ELISA plates to analyze its sensitivity, / and specificit