原生质体紫外诱变技术筛选红霉素高产菌株地研究.pdfVIP

维普资讯 中 国 药 科 大 学 学 报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2000．31(4)：30l～303 30l 弓小一弓 原生质体紫外诱变技术筛选红霉素高产菌株的研究 乙／ 襄 了 L 王筱虹 倪文琴 刘 — — — — ～ — — — — 一 (中国药科大学生物制药学院，南京210009) ／?，、 1 { } 摘 要 将红霉素产生菌——红色链霉菌的菌丝体经溶菌酶去壁后获得的原生质体 ．用紫外线照射一定时 间后．在再生培养基上得到再生菌株，通过活性测定，挑选抑菌豳大而清晰的再生菌株进行摇瓶筛选，摄后得到比 对照菌株效价提高225·8 的高产菌株HP-3 关键词兰竺苎；要圭里 苎燮 、孑仞球 ㈩ ／ 红霉素及红霉素衍生物主要用于各类感染性 25，pH7．0～7，2。 疾病．是国内外应用最广的大环 内酯类抗生素之 摇瓶发酵培养基 ()：蛋 白胨 3．5．葡萄糖 一 。 其抗菌谱与青霉紊G相似，主要抗革兰氏阳性 3．0，淀粉 4．0，硫酸铵 0．1，磷酸二氢钾 0．025，碳 菌，对革兰氏阴性菌活性较差，并可用于青霉素过 酸钙 0．6。 敏患者。 P氏液(1)(g／L)(用于洗涤菌丝体，配制酶液 原生质体诱变技术 已经应用于一些抗生素和 及洗涤和悬浮原生质体)：蔗糖 l0．3，硫酸钾 有机酸的菌种选育中，对于链霉菌的原生质体的研 0．025，磷酸二氢钾 0．005．氯化镁 0．08，氯化钙 究已有不少报道。国外已有利用原生质体诱变技术 0．28，pH7．2。 进行红霉素育种研究的不少报道，但国内这方面的 + 工作刚刚起步．与国外相比存在着一定差距。本文 … 一 主要报道用紫外诱变原生质体再生菌株，经过摇瓶 2．1 原生质体制备 筛选，获得高产菌株HP一3。 方法参照文献[23。 l 实验材料 。· 的P氏液 5ml 直径 菌种：红色链霉菌 (胁!：m· !n )：来 自 为 6cm的无菌平皿 内，平皿放置在距离为 30cm 本实验室。 的l5W 的紫外灯管下的磁力搅拌器上进行照射． 斜面培养基( )：蛋 白胨 1．0，玉米浆1．0，淀 照射时间分别为30、60、90s，同时设置对照(cK)， 粉 1．0，硫酸铵 0．3，氯化钠 0．3，碳酸钙 0．25，琼 照射后的样品及CK放在铝盒 内，于 30c暗修复 脂 2．0，pH7．0～7．2。