甜菜抗根腐病基因ISSR分子标记的初步的研究.pdfVIP

维普资讯 第 2l卷第 2期 齐 齐 眙 尔 大 学 学 报 V01．21．No．2 2005年6月 JournalofQiqiharUniversity June，2005 甜菜抗根腐病基因 ISSR分子标记的初步研究 吴旭红 (齐齐哈尔大学卡命科学与工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘 要：以感病 ×抗病的甜菜种问杂交组合KWS9419×ZD204的Fl代l7个单株及ZD自交一代l6个单株为试材，采用 BSA法和ISSR技术，通过对 155个随机引物的筛选，获得了一个与甜菜抗根腐病基 因连锁的ISSR标记OPP0760，可以用 作抗根腐病基因的分子辅助选择的依据。 关 键 词：甜菜；抗根腐病基夭【I：ISSR标记 中图分类号：9291 文献标识码 ：A ‘ 文章编号：1007—984X(2005)02—0030—03 甜菜病害包括细菌、真菌以及病毒引起的褐斑病、黄化毒病、立枯病及丛根病等多种病害，甜菜根腐 病 (rootrot]是世界性的甜菜重要真菌病害，尤其在我国东北地区发病最重。目前生产上对该病的防治主要 以化学药剂防治为主，易引起农药残毒和环境污染，而且真菌能产生耐药性。传统的甜菜抗病育种已培育出不 少抗病品种，但由于常常存在基冈连锁现象，按传统育种程序往往很难获得既有抗病性，又有 良好农艺性 状的品种。分子标记技术有助于从DNA水平上寻找与抗病基冈连锁的遗传标记。冈此，借助分子标记等分 子生物学手段获得抗 (耐)病甜菜新品种 (系)，是 目前甜菜抗病育种的重要途径 。本研究利用RAPD、ISSR 分子标记技术，对甜菜高抗品种ZD204及其杂种后代进行抗病基因的快速标记，以达到分子标记辅助抗病育 种早期鉴定选择杂种的目的。 SSR(simplesequencerepeats简单重复序列)，又称微卫星 (MicrosatelliteDNA o此序列广泛存在人类 及动物和植物基冈中。主要是 1—4个核苷酸的重复，重复单位数 目的差异形成了SSR位点上的多态性。 不同遗传材料重复次数的可变性，导致了SSR长度的高度变异性，这一变异正是SSR标记产生的基础。尽 管微卫星DNA分布于整个基冈组的不同位置，但其两端序列多是保守的单拷贝序列，冈此可以根据这两端 的序列设计一对特异引物 ，通过 PCR技术将其间的核心微卫星 DNA序列扩增出来 ，利用电泳分析技术就 可获得其长度多态性，即SSR标记。 1 材料与方法 试材为甜菜种问杂交组合KWS9419XZD204的F．代 17个单株及ZD自交一代 16个单株，配制杂交组合， 利用这个杂交组合F群体进行分子标记筛选，抗病对照为WS9400，感病对照为BTA807，将病毒在温室苗 期利用沾根灌苗法人工接种，接种后第 7d、l1d进行病情调查。 1．1 基因组 DNA的提取及 SSR和 ISSR引物 甜菜基冈组 DNA的提取采用改良CTAB法川，干燥后溶于 TE缓冲液中。PCR产物回收参照姜泊等忙’ 的方法，RAPD反应体系参照王跃进等…的方法。样品送上海生工公司进行测序。 根据Michelmore等解介绍的集群分离分析法 (bulkedsegregantanalysis)，随机选取 1O个抗病株DNA 和 1O个感病株DNA分别等量混合建立抗病池和感病池。 10个碱基随机引物为上海生工公司合成，编号为OPPO001一OPPO155。dNTP、Taq、Bnffer等由Promega 公司提供。 ． 收稿 日期：2o05—0I—I4 科研项 目：黑龙江省教育厅项 日。项 目编号 作者简介：吴旭红．女．1962年生．大学本科．副教授，主要从事生物化学研究。 维普资讯 第2期 甜菜抗根腐病基因 ISSR分子标记的初步研究