甲型肝炎病毒Vero细胞适应株的选育研究-甲型肝炎病毒Vero.pdfVIP

维普资讯 微生物学免疫学进展2003年第31卷第4期 甲型肝炎病毒 Vero细胞适应株的选育研究 陈尔佳 ，马 波 ，魏绍忠 (1．云南沃森生物技术有限公司，昆明 650033；2．云南润生药业有限公司，昆明 650031) 摘 要：将甲肝患者粪便中分离的甲型肝炎病毒在Vero细胞中进行适应性培养 ，选育高滴度适应株应用于甲肝灭 活疫苗研究。在 Vero细胞上连续传代，测抗原滴度和感染性滴度，满意后按 WHO推荐的甲型肝炎灭活疫苗规程 进行灭活疫苗试制研究。经Vero细胞 14次适应性传代后，病毒抗原滴度可高达 1：2560，感染性滴度为8．23LogC． cID5o／ml。试制的灭活疫苗 HPSEC检测在280nln时仅有一个高峰，SDS．PAGE电泳 ，在22kD、26kD和33kD处有 三条蛋白带，和HAVVP3、VP2和VP1的位置相同。ICR小鼠效力试验表明疫苗剂量 1600EU／ml与 Merck疫苗 50U效果相似。通过研究获得了Veto细胞甲肝病毒适应株YN5株 ，初步证明可作为甲型肝炎灭活疫苗的候选毒 株。 关键词：甲型肝炎病毒 ；YN5株；Vero细胞；灭活疫苗 中图分类号：R373 ·2 1 文献标识码：A 文章编号 ：1005—5673(2003)04-0001-04 ThestudyonadaptationofhepatitisAvirusYN5straininVerocell CHEN西曲 ，‘MABo，WE1Shooz·hong2 (1． Yunnan Wosen Biotech Co．，Ltd，Kunming 650033，China；2．Yunna n Runsheng PharmaceuticalCo ．ILid，Kunmm ／ng 650031，China) Abstract：YN5strainwasisolatedfrom fecesofhepatitisA patientsandadaptedtoverocells．Theadaptde YN5strainWaS identifiedasHAVwiththespecfficexperiment．AntigenictitersofYN5strainP14onVerocellswere1：2560，infectivetit· resofthatWas 8．23LogCCID5o／m1．TheexperimentalvaccineWas madeaccordingtoWHOrequirementforinactivatedhepa· tiffsA vaccine．Experimental vaccinewasonlyonepeak throughHPSEC at280nm．BySDS·PAGE，YN5 straincontains ， threepeptidecomponentsVP1，VP2，VP3，theirmolecularweightsraeabout33，26，22kD respectively．Inaddition，theeffi · ciencyoftheexperimentalvaccine，ICRmiceimmunizedwith1600EU／rnlWassameasMerckvaccine(50U)．Theresearch provideYN5strainadaptedVerocellnadWaSawellstrainofrproducinginactivatde vaccine． Keywords：HepatitisAvirus(HAV)；YN5strain；Verocell；Inactivatedvaccine 甲型肝炎 (简称 甲肝)是 由甲肝病毒 (Hepatitis 培养 。因此，筛选出能在 Vero细胞上高效稳定 Avirus，HAV)感染人体引起的一种急性传染病 ，其 增殖的甲肝灭活疫苗病毒候选株将有利于 甲肝灭活 预防可使用 甲肝减毒活疫苗或灭活疫苗。两者相 疫苗产量的提高和成本的降低。试验以Vero细胞 比，甲肝灭活疫苗具有较强的免疫原性，免疫后能诱 为细胞基质，成功筛选出一株可以高效、稳定增殖的 发高水平的体液免疫，无病毒返祖，疫苗稳定性好， 甲肝病毒YN5株，并进行了灭活疫苗的初步试制研 便于保