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细胞分离的前奏：密度梯度离心 密度梯度离心（density gradient centrifugation ）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连 续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分离。这 种分离又可分为速率沉降和等密度沉降两种。速率沉降（velocity sedimentation ）主要用于分离密 度相近而大小不等的细胞或细胞器。等密度沉降（isopycnic sedimentation ）在离心后细胞沉降于 密度梯度液中与自身密度相同的密度平衡点，适用于分离密度不等的颗粒。 沉降介质应当是无毒的，可在需要的密度 和分离介质。它还可以用于制备培养基、核酸 范围内形成梯度，pH 值和渗透压可以调节， 杂交、电泳和免疫研究。Ficoll PM400 的渗 在高密度时也不粘稠，并能保持细胞或颗粒的 透压性质比蔗糖好，浓度达到50%时密度可 完整性。 以达到1.2 g/ml。因为它的分子量高，且可透 析物质含量低，所以Ficoll PM400 通常不会 常用的沉降介质有哪些？你是不是马上 渗透细胞膜。 就想到了Ficoll 和Percoll，没错，那可是GE 的明星产品之一，已经畅销几十年了。Ficoll 在离心时，大家通常会调整培养基的密度 是聚蔗糖，常用的Ficoll-400，分子量为40kD ， 和粘度，让颗粒以合适的速度沉降。合适浓度 具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓 的蔗糖则渗透压太高，会伤害细胞。而如果你 度的Ficoll 溶液粘性高，易使细胞聚集，故通 换用蔗糖聚合物Ficoll，你就可以得到想要的 常使用60g/L 的低浓度溶液，密度为1.020， 密度，也不会显著增加渗透压。这样你就能够 添加比重为1.200 的泛影酸钠以增加密度， 保持细胞完整，并维持细胞活力。因此Ficoll 就形成了平时常用的Ficoll-Paque PLUS。 取代了蔗糖用于密度梯度离心，并主要用于常 Percoll 是一种经聚乙烯吡咯酮涂层(PVP)处 规的细胞分离。Ficoll 还是分离淋巴细胞的 理的硅胶颗粒，对细胞无毒性。利用Percoll Ficoll-Paque PLUS 的主要原料。 液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原 Ficoll-Paque PLUS 理，将密度不等的细胞分离纯化。该法是纯化 细胞、亚细胞颗粒和大的病毒的一个较好的方 Ficoll-Paque PLUS 就是我们经常说的 法，但操作流程较长，手续较多。下面我们就 淋巴细胞分离液，在市场上销售了30 多年， 对这些介质进行详细的介绍： 从事免疫学研究的人估计都不会陌生。 Ficoll-Paque PLUS 是无菌的、即用型的 Ficoll™ PM400 Ficoll-泛影酸钠，有着合适的密度、粘度和渗 Ficoll PM400 是中性、亲水的蔗糖聚合 透压，能够简单快速地从人外周血、骨髓和脐 物，平均分子量为40kD 。一直以来它都被用 带血中分离淋巴细胞。它的内毒素水平非常 于形成密度梯度，来分离和提取真核细胞、细 低，小于0.12EU/ml 。 胞器和细菌细胞，以及分离淋巴细胞的稳定剂 除