耐热菌的竞争定量PCR检测方法优化与建立.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(2):375-380 Scientia Agricultura Sinica 耐热菌的竞争定量PCR检测方法优化与建立 1 2 1 李建科 ，冯再平 ，仇农学 1 2 ( 陕西师范大学食品工程系，西安 710062 ； 兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州 730050) 摘要：【目的】研究苹果浓缩汁中耐热菌（ Alicyclobacillus acidoterrestris ）的定量 PCR 快速检测法。【方 法】通过引物设计、PCR 扩增及凝胶纯化试剂盒回收，构建并获得耐热菌的 PCR 竞争模板；用获得的竞争模板作 为定量内标物建立耐热菌的竞争定量 PCR（QC-PCR）检测体系。【结果】经对建立的 QC-PCR 检测体系优化，目标 模板检测灵敏度由5×104 个分子/PCR 体系，提高到50个分子/PCR 体系，竞争模板和目标模板分子共扩增可检测 到5×102 3 个目标模板分子/PCR 体系，并能从人工回添苹果浓缩汁样品中定量检测到5×10 cfu/ PCR 体系的耐热 菌，整个检测时间为 4～5 h，比传统的细菌培养皿培养记数法时间（4～5 d）大大缩短。【结论】本研究建立的 耐热菌竞争定量 PCR 检测法特异、快速，可作为微生物 PCR 竞争模板构建和建立竞争定量 PCR 的方法学参考，也 可用于商品果汁和苹果浓缩汁工业化生产中耐热菌的快速检测和质量安全控制。 关键词：耐热菌；苹果浓缩汁；竞争定量PCR Optimization and Establishment of Quantitatively Competitive PCR System for the Detection of Alicyclobacillus acidoterrestris 1 2 1 LI Jian-ke , FENG Zai-ping , QIU Nong-xue 1 2 ( Department of Food Engineering, Shaanxi Normal University, Xi’an 710062; College of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050) Abstract: 【Objective 】To study the detective method of Alicyclobacillus acidoterrestris in apple juice concentrate (AJC) by quantitatively competitive polymerase chain reaction (QC-PCR) system. 【Method 】 The QC-PCR system for detection of Alicyclobacillus acidoterrestris was established th