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Animal
中国动物传染病学报2010，18(1)：28—33 ChineseJournalof InfectiousDiseases
·研究论文·
建立与初步应用
刘邓12袁秀芳2，冉多良1，徐丽华2，牛登元3，王朝文3，王一成2
(1．新疆农业大学，乌鲁木齐830052；2．浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州310021；
3．甘肃农业大学，兰州730070)
摘要：根据GenBankq公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列，设计了一对特异性引物和探针，扩增长度为
186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品，建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan
荧光定量PCR方法。该方法在108~101
的质粒DNA，以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细
小病毒为模板时，均检测不到荧光信号，而重复性实验中其变异系数均小于2％，表明此方法具有很好的
特异性和重复性。应用此方法对采集的60份临床样品进行检测，其阳性检出率为92％，而用常规RT-PCR
方法进行检测，阳性检出率仅为80％。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PCR检测方法。
关键词：猪流行性腹泻病毒；荧光定量RT-PCR；TaqMan荧光探针
文献标识码：A
中图分类号：$858．282．659．6：Q7
DEVELOPMENTANDPRELIMINARYAPPLICATIoNoF
A REAL．TlMEPCRFORDETECTloN
TAOM【AN。BASED
oFPoRCINEEPlDEMICDIARRHEAVIRUS
LIU Li—hua2，NIU
Deng-yuan3，
Den91一，YUANXiu．fan92，凡ⅢDuo．1ian91，XU
Ⅵ，ANGChao．wen’，WANG
Yi．chen92
830052．China；
fi．CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgricultural
University,Urumqi
2．AnimalHusbandryand 310021，China；
3CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou73007D，China)
Abstract：A186 was the and designed toPEDV-N
bpfragmentamplifiedusingspecificprimersTaqManprobe according
for was
in real—time PCRdetectionofPEDV
depositedGenBank．Subsequently,aquantitative developed
genesequence
withstandard DNAfromtheclonedPEDV-N ofthe was
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