1株产纤维素酶高温根霉的分离与鉴定.pdfVIP

· 72 · 陕 西 农 业 科 学 2Ol2(1) 1株产纤维素酶高温根霉的分离和鉴定 贺建超 。杨云云 。贺榆霞 ，刘建玲。 (1．陕西省微生物研究所 陕西 西安 710043；2．西北大学 生命科学院，陕西 西安 710069) 摘 要：从镐京采集草腐料作为样品，65℃高温水浴草腐料 12h后，通过平板培养法分 离，纯化并筛选高温根 霉 ，然后利用刚果红染色法和 DNS法复筛，筛选 出 1株高产纤维素酶的高温根霉 Z一3，根据菌种形态特征 。 培养特征和 18srDNA序列比对分析 ，初步鉴定菌株为小孢根霉菌属。 关键词 ：高温 ；纤维素酶 ；筛选；鉴定 纤维素是世界上蕴藏量最丰富 的可再生资 282．22)的热 水溶 液 中，再加 上 5g结 晶酚 源 ，绝大多数 由绿色植物通过光合作用合成口]，我 (C。H OH，MW 一94．11)和 5g无 水亚 硫酸 钠 国年产约 6亿 t各类农作物秸秆 ]。草腐料所需 (NaSO。，MW=126．O4)，搅拌溶解 ，冷却后移入 栽培原料主要是作物秸秆 ，以及牛粪。秸秆等作 1000ml容量瓶 中用蒸馏水定容至 l000ml，充 物纤维素含量高 ，在发酵过程 中很难降解 ，而腐殖 分混匀。贮于棕色瓶 中，室温放置一周后使用 。 质是在木质纤维素分解过程 中形成的，因此 ，能否 1．1．2 样品 来 自镐京的草腐料。 有效地加强纤维素的分解转化 ，成为发酵料能否 1．1．3 培养基 充分腐熟的关键。采用微生物技术处理秸秆是当 (1) 初筛培养基[。PDA培养基 ：马铃薯 前研究最多的一种秸秆处理方法 。已有很多关于 (去皮)：200g，葡萄糖 ：20g，水 ：1000ml，pH 纤维素酶生产菌株的报道 ，多数以木霉 ，串珠镰刀 自然 ，添加青霉素 5mg／1。 霉 ，曲霉以及少数种类的细菌为研究对象 ，对根霉 (2)复筛培养基口]。羧甲基纤维素钠培养基 ： 产纤维素酶的研究报道较少[3]。 CMC—Na15g，NH ．NO31g，酵母膏 ：lg，Mg— 高温菌具有耐热嗜热 的生活特性 ，其酶有较 SO4．7H2O 0．5 g，KH2PO4lg，H2O 1000ml， 高的热稳定性 ，目前主要应用于石油开采、提供生 琼脂 20g，pH 自然 ； 物能源 以及处理难降解有机物。胡 国全等人于 (3)摇瓶发酵培养基 。液体产酶培养基 ：稻 2004年获得一株极端嗜热纤维素分解 菌 B2，有 草粉 ：50g／1，麸 皮：15g／1，(NH )2SO ：10g／1， 较强的纤维素分解能力-4]。高温根霉常见于 自然 自来水配制 ，起始 pH一5．0。 界的高温环境 ，如各种堆肥 、草垛 、甘蔗渣堆等 ，他 1．2 方法 们是高温条件下有机物 的旺盛分解者 ，在堆肥 的 1．2．1 菌种初筛 将采集的样品称取 5g，置于 快速腐熟 中具有重要作用[5]。因此试验从镐京草 45m1无菌水 的三角瓶 中，62—64℃高温水浴，水 腐料中分离到 l株具有纤维素酶活力高的高温根 浴时间为 lO一12h，每隔 1h振荡一次。吸取上 霉 ，并对其进行 了初步鉴定和酶活力研究 。 清液用无菌水进行 10—7—1O一10梯度稀释 。涂 布于选择培养基平板 ，37℃培养 7dLg]，选择生长 1 材料与方法 状况 良好的单菌落挑 出，接入选择性