P16蛋白表达在鲍温样丘疹病和尖锐湿疣鉴别诊断中的意义.pdfVIP

·基础研究· P1 6蛋白表达在鲍温样丘疹病与尖锐湿疣 鉴别诊断中的意义 郭书萍白莉冯艳 鲍温样丘疹病(bowenoid 1．4结果判定 papulosis，BP)与人乳头瘤病毒 1．4．1 (humanpapillomavirus，HPV)感染密切相关，f临床上易误诊为FQ—PCR结果判定：根据荧光强度一循环数曲线。有明 尖锐湿疣(condylomaacuminatum，CA)。我们先前的研究…表显对数增长期者为阳性，否则为阴性。 明在HPV相关的cA与BP皮损中p16基因的表达产物——1．4．2免疫组织化学结果判定：细胞核呈棕黄色为阳性，无 P16蛋白过度表达，且这两种疾病组织中P16蛋白表达升高棕黄色或可疑者为阴性。每张阳性切片选取5个高倍视野 的程度不同。本研究应用免疫组织化学法检测P16蛋白在BP 以及CA组织中的表达情况，同时用荧光定量聚合酶链反应 百分比[“。 16／18 1．5统计学方法 (F耻-PcR)方法检测上述相同组织中HPV6／11、HPV DNA。 探讨P16蛋白表达在BP与CA鉴别诊断中的意义。 采用SPSSl0．0统计软件处理。所有百分数均经平方根反 l对象与方法 正弦(sin‘1P)转换后进行检验，两组均数间的比较用t检验法。 1．1研究对象 2002—2005年共收集标本70例。分两组：CA组35例，以P0．05为差异有统计学意义。 2结 果 其中男性19例，女性16例；年龄22—65岁，平均(37+10)岁。 2．1 CA患者l}缶床表现典型，5％醋酸白试验(+)，病理表现典型。BP 组35例，其中男性2l例，女性14例：年龄25～46岁，平均 达主要位于挖空细胞及周围少量棘细胞，呈局灶状分布(图 (39±7)岁，其中30例5％醋酸白试验(+)。两组取材部位：男 性为阴茎、包皮及肛门；女性为大、小阴唇，肛门。上述标本手 术切除后从中间剖开．一块置于生理盐水中用于FQ—PCR检 测HPVDNA；另一块石蜡包埋，用于免疫组织化学研究。 率14％；P16蛋白阳性表达弥漫分布于表皮全层．异形核内阳 1．2主要试剂 性明显(图2)；HPV6／11、16／18DNA均阴性的5例中有1例 鼠抗人单克隆抗体P16、鼠抗人单克隆抗体Ki一67、生物P16蛋白阳性表达。两组样本比较．P16蛋白表达差异有统计 素化的第二抗体和链霉菌抗生物素过氧化物酶复合物(SP复 学意义(P0．01)，见表1。 合物)均为SantaCruz公司产品．购自北京中山生物技术有 2．2 阳性表达。CA中，Ki一67蛋白阳性表达主要位于基底层及其 限公司。HPV6／11型和HPVl6／18型FQ—PCR诊断试剂盒为 中山医科大学安达基因诊断中心提供：仪器为美国PE公司 生产的PE--5700全自动实时FQ—PCR仪。 白阳性表达弥漫分布于表皮全层，部分以中下层为主，异形核 1．3实验方法 内阳性明显(图4)。两组样本比较Ki一67蛋白表达的差异有 1．3．1 FQ—PCR检测：按试剂盒说明操作。送检组织研碎，加统计学意义(尸O．01)。见表l。 000 DNA提取液充分混匀，然后100oC水浴裂解，12 r／rain离 表1两组样本P16Ki-67蛋白表达的 心5rain，取上清2斗l加入20斗l反应体系中做PCR反应，同