靶向ATP6LRNA干扰抑制乳腺癌细胞体外侵袭能力.pdfVIP

第20卷第2期 江 苏 大学 学 报 (医学 版) Vo1．20 No．2 2010年2月 JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Mar．2010 靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力 游海燕 ，金 洁 ，唐 宁 ，邓 云 ，舒惠群 ，沈秋瑾 ，覃文新 (1．上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室，上海200032；2．江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江212013) [摘 要] 目的：通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能，检测MCF-7／ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。 方法：采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7／ADR细胞，通过荧光分光光度计检测 BCECF与细胞分 泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量；用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表 达情况；用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性；用细胞侵袭实验(Transwel1)检测细胞体外侵袭能力。 结果：在MCF一7／ADR细胞中，下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H 能力减弱；细胞中MMP-2表达水平无变 化；细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱；细胞的体外侵袭能力下降。结论：靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的 功能，从而抑制MCF-7／ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。 [关键词] ATP6L；RNA干扰；侵袭；肿瘤 [中图分类号] R737．9 [文献标志码] A [文章编号] 1671—7783(2010)02—0126—05 SmallinterferingRNA targetingthesubunitATP6L ofprotonpump V—ATPasesuppressestheinvasion ofbreastcancercellsinvitro YOUHai—yan，删 fie，TANGNing，DENGYun，SHUHui．qun，SHENQiu-jin，Q，ⅣWen—xin (1．StateKeyLaboratoryforOncogenesandRelatedGenes，ShanghaiJiaoTongUniversityCancerInstitute，Shanghai200032；2．Schoolof MedicalScienceandLaboratoryMedicine，JiangsuUniversity，ZhenjiangJiangsu212013，China) [Abstract] Objective：ToexplorewhethertheinvasionofMCF-7／ADRcellscouldbeaffectedbyin vitroinhibitionofV．ATPaseactivity．M ethods：TheexpressionofATP6Lwasknockeddownbyspecific siRNA inbreastcancercellline．MCF-7／ADR．Thenthecapabilityofprotonextrusionwasanalyzedbyde． tectingtheextracellularpH ofthesupernatantusingpH—sensitivefluorescentdyeBCECFonaluminescence spectrometer．TheexpressionofMMP一2andactivityofgelatinaseweredeterminatedbyreal—timefluorogen- ticquantitativePCR andzymography．Theabilityofcellinvasioninvitrowastestedbytranswellassay．Re- suits：Protonextrusionwasdecreased iflMCF_7／ADR cellstreatedwith siRNA．ATP6Lascomparedwith thecontro1．TherewasnodifferenceintheexpressionofMMP．2betweensiRNA—ATP6L treat