M3受体和β-catenin在大鼠心室肌结构共定位关系的研究.pdfVIP

M3 受体与β-catenin 在大鼠心室肌结构共定位关系的 研究1 1 2 1 1 1 1 1 1，3 王玉平 ，张勇 ，杭鹏洲 ，赵金龙 ，纪红蕊 ，王莉安 ，毕辉 ，杜智敏 1 哈尔滨医科大学临床药理教研室，哈尔滨 （150081 ） 2 哈尔滨医科大学药理教研室，哈尔滨 （150081 ） 3 黑龙江省高校重点实验室，哈尔滨 （150081） E-mail：dzm1956@126.com 摘 要：目的研究 M3 受体与粘连蛋白β-catenin 在大鼠心肌缺血时的结构相互作用，为筛 选抗心律失常药物新靶点提供依据。方法 结扎大鼠左旋冠状动脉前降支建立心肌缺血模型， 取心脏组织，并分别用激光共聚焦显微镜及免疫沉淀与免疫印迹方法，研究 M3 受体与 β-catenin 在大鼠心室肌结构共定位关系。结果 在大鼠心肌细胞膜上M3 与β-catenin 存在结 构共定位关系，免疫沉淀发现随着缺血时间的延长，共定位关系加强；在急性心肌缺血模型 中胆碱能增强两者的结构共定位关系。结论M3 与β-catenin 在大鼠心室肌细胞存在结构共定 位关系，这种共定位关系可能是新的抗心律失常药的作用靶点。 关键词：M3 受体；β-catenin；结构共定位；心肌缺血 中图分类号：R96 1. 引言 近年来，随着对心脏在分子生物学方面研究的加深，M3 受体对心肌细胞的保护作用已 经明确，可以介导一种新的钾电流 I [1,2] [3] KM3 ，具有负性肌力和负性频率的作用 等,在缺血性 心律失常等疾病的发生发展中发挥了重要作用，是一种新型的抗心律失常靶点。我们已经证 明 β-catenin,在心脏发生缺血性心律失常的病理过程中，参与了心肌重构的过程[4] 。本文对 M3 与 β-catenin 在心肌细胞膜上的结构共定位进行研究，阐明 M3 受体保护心脏新的机制， 并为为抗心律失常药物提供了新的药物作用靶点。 2. 材料和方法 2.1 材料 2.1.1 实验动物 Wistar 大鼠，雄性，250±20g ，25 只，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。 2.1.2 主要试剂 抗 M3 多克隆抗体和抗 β-catenin 单克隆抗体，免疫沉淀用 Protein-Agarose 均购自 Santa Cruz 生物技术公司; 红外荧光标记的二抗 AlexaFluor594 和 AlexaFluor488 购自 Molecular Probes 公司;BCA 蛋白定量试剂盒购自 Pierce 公司；Western blotting 封闭蛋白干粉为博士德 生物工程有限公司产品；PVDF 膜为 Bio-RAD 公司产品;蛋白酶抑制剂、蛋白电泳液、转膜 液和考马斯亮蓝染液均为华特生生物技术公司产品；胆碱购自 Sigma 公司。 2.1.3 仪器 差速离心机为日本 Hitachi 公司产品；蛋白电泳仪为 Bio-RAD 公司产品;CM-1850 冰冻 切片机为 Leica 公司产品；激光共聚焦显微镜为日本 Olympus 公司产品；Odyssey 红外扫描 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（No.20050226010 ）和国家自然科学基金（No） 的资助。 - 1 - 成像系统为美国 LI-COR 公司产品。 2.2 方法 2.2.1 免疫组化检测 [5] 取正常 Wistar 大鼠