Akt1与Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1侵袭与迁移的影响.pdfVIP

天津医药2011年4月第 39卷 第4期 295 doi：10．3969~．issn．0253-9896．2011．04．003 Aktl和Akt2基因转染对人 胃黏膜上皮细胞GES一1 侵袭和迁移的影响 谢甲贝 张庆瑜 康春生 韩 静 王 涛 张 洁 摘要 目的：观察蛋白激酶B1(Akt1)和蛋白激酶B2(Akt2)基因转染人胃黏膜上皮细胞系GES一1后对其侵袭和迁 移的影响。方法：采用脂质体法将分别含Aktl和Akt2基因全长cDNA序列的p-LXSN—Aktl(Aktl组)和p-LXSN—Akt2 (Akt2组)质粒转染到GES一1细胞，以转染p-LXSN空载质粒的细胞为空载组，以正常未转染细胞为对照组 ，并经抗生 素G418筛选抗性克隆，蛋白印迹 (Westernblot)鉴定各组细胞Aktl、Akt2及基质金属蛋白酶(MMP)一2的蛋白表达水 平；Transwell法分析转染后细胞的侵袭能力；用免疫荧光法观察转染后GES一1细胞丝状肌动蛋白(F—actin)的变化。 结果：Aktl组和Akt2组均获得了稳定表达Aktl和Akt2基因的GES一1细胞模型；2组MMP一2蛋白表达均高于空载组和 对照组(P0．O1)。Transwell法显示Aktl和Akt2组GES一1细胞侵袭能力均明显增2il(P0．01)。免疫荧光发现Aktl 和Akt2组F—actin的聚集均增加。结论：Aktl、Akt2基因均可以通过增加细胞侵袭力和迁移力，导致GES一1细胞恶性 转化。 关键词 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 胃黏膜 上皮细胞 细胞系 基质金属蛋白酶9 肌动蛋白类 肿瘤转移 EffectsofAkt1andAkt2GeneTransfectiononInvasionandMigrationofHuman GastricEpitheliaICelIGES-1 XIEJiabei，ZHANGQingyu，KANGChunsheng，HANJing，WANGTao，ZHANGJie GeneralHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin300052，China Abstract Objective：ToobservetheeffectsofproteinkinaseB1(Akt1)andAkt2genetransfectiononinvasionandmi— grationofhumangastricepithelialcelllineGES-1．Methods：Theplasmidofp-LXSN-Aktl，whichcontainedthewhole Aktlgenesequence，andp-LXSN-Akt2，whichcontainedthewholeAkt2genesequence，wereusedtotransfectGES一1cells withlipofectamine．TheGES-1cells，whichweretransfeetedbytheemptyvectorp-LXSN，weretheblackvector，andtheno transfeetedoneswerethecontro1．AndthenthepositivecellcloneswereselectedwithantibioticsG418．Theproteinexpres— sionsofAktl，Akt2andMMP-2weremeasuredbyWesternblottinganalysis．Transwellassaywasusedtoanalyzetheinva- sionandmetastasiscapability．Theexpression ofF-actinwasdetectedbyimmunofluorescence．Results：TheGES-1cell modelsexpressedAkttgene(