用荧光探针签别CYP2C9-3基因.pdfVIP

第30卷，第6期 光谱学与光谱分析 201 and 0年6月 SpectroscopySpectralJ吣1alysis June，2010 用荧光探针签别CYP2C9*3基因 李庆勇，曲震寰，祖元刚，付玉杰 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 150040 摘要用一种基激复合物荧光探针系统来签别碱基错配的CYP2C9*3基因，该系统选择两个分开的与靶 点碱基相埘应的12碱基荧光标记的寡核苷酸作为探针，分别对24碱基、47碱基、质粒(3165bp)的靶点 CYP2C9基因和CYP2C9*3基因进行杂交配对，结果该基激复合物荧光探针系统能有效签别各种长度的 CYP2C9基因和CYP2C9*3基凶，背景f扰很低，灵敏度高，町尝试用于其他基因型的遗传多态性的签别。 关键词荧光探针；签别；CYP2C9*3基因；遗传多态性 中图分类号：0657．3文献标识码：A CYP2C9基因 引 言 P450 细胞色素P450 2C9。CYP2C9)的 7探针和 2C9(Cytochrome 统签别碱基错配的CYP2C9*3基冈(Cyp3’和Cyp5 基因是用于编码细胞色素氧化酶CYP2C9，该酶在药物和内靶点targetDNA序列见图1)，尝试用该探针系统识别 源性物质代谢中起茕要作用，该基因具有遗传多态性，这种 CYP2C9基因型的遗传多态性。 多态性与药物代谢能力的差异和某些疾病发生密切相关，关 于该基因的多态性和功能的关系研究报道很多[I矗]，如何用 1实验部分 荧光探针更有效地识别正常基因与遗传多态性基因，显得十 分重要。由于不『I司基因组的尺寸很大(106～109bp)，为r避1．I仪器和试剂 1100 免随意的非特异性的靶点与探针之间的配对，采用的单链寡 Agilent 核件酸荧光探针至少包含17～20个碱基长度，单链寡核苷Cary4000可精密控温的荧光分光光度计，VarianCary1E可 酸荧光探针检测指定序列DNA的通常会伴有很高的背景荧 控温紫外可见分光光度计，Pap、Nap荧光物质是按照文献 光Lal。另一种方法是通过两个分开的短链寡核仟酸探针杂交 met-tar- 到同一个DNA靶点上形成芘的基激缔合物大大降低r背景与之对应的24碱基(24met-target)和47碱基(47 荧光，(见图1X=y=pyrene，即pyr)，这个基激缔合物的 特征光谱较单体特征光谱发生了100nlTl的Stokes位子生物学课题组提供。 移【4。6]，因『fIi在两个探针和靶点杂交形成基激缔合物的过程1．2实验方法 中系统自动装备r检测器，因而大大降低r荧光背景。最近 1．2．1探针及靶点浓度的测定方法 发展的基激复合物DNA检测系统。荧光团X和y不同，具 采用VarianCary1E叮控温紫外可见分光光度计测定 有更广泛的应用Iji『景。无论是幕激缔合物还是基激复合物的 DNA在260 形成，都要求两个荧光团必须在空间上充分接近，芘的基激 的定量是采用样品购买时所提供毫摩尔消光系数(￡z∞)，Cyp 缔合物两个芘分子之间距离大约3．5A，因而基激缔合物和 基激复合物相当于一个碱基对的厚度LT．S]。 吸光值(260 作者前期报到一个新基激复合物荧光探针系统(见图 rim)／e260计算探针及靶点的浓度。 收稿日期：2009—11—28．修订日期：2010-02-26 目资助 作者简介：李庆勇，1973年生。东北林