腾冲嗜热厌氧杆菌6_磷酸_葡萄糖苷酶的表达和结晶及其功能鉴定.pdfVIP

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2017-08-07 发布于安徽
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腾冲嗜热厌氧杆菌6_磷酸_葡萄糖苷酶的表达和结晶及其功能鉴定.pdf

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ISSN 2008 10 CN 113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biolo y 24( 10) : 916~ 924 6 * 尹捷, 刘一苇, 李洁, 马延和, 向华, 严景华, 高福 ( 中国科学院微生物研究所, 北京 100101) 6磷酸葡萄糖苷酶 ( Pb L, EC 32186) 催化由磷酸烯醇式丙酮酸糖磷酸转移酶系 (PEPPTS) 转运入胞内的某些磷酸化二糖水解. 一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌 ( Thermoanaerobacter tengcongensis) 编码Pb L ( 436 个氨基酸残基) 的开放阅读框 (ORF TTE0337) 被成功克隆, 并在大肠杆菌BL21( Escherichia coli BL21) 中有活性地表达. 序列分析显示, 该6磷酸葡萄糖苷酶属于糖基水解酶家族4( GH4) , 与枯草杆菌( Bacillus subtilis) 的LicH, 海栖热袍菌( Thermotoga Maritima) 的B lT 的一致性分别为62% 和40%. 纯化后的重组Pb L( rPb L) 经SDSPAGE 分析, 为1 条分子量约50 kD 2+ + 的蛋白条带, 与推测的分子量大小一致. 该酶需要Mn NAD 和还原剂为辅因子, 能专一性地水解pNPG6P, 并在85 达到最高酶活性. Western 免疫印迹实验, 利用针对rPb L 的多克隆抗体血清, 能从腾冲嗜热厌氧杆菌胞内检测到Pb L 的表达. 此外, rPb L 的蛋白晶体已被筛选获得, 并收集到24 分辨率的衍射数据. 采用分子置换法的结构解析目前仍在进行中. 6磷酸葡萄糖苷酶( Pb L) ; 糖基水解酶家族4( GH4) ; 蛋白结晶; 耐热性 Q71 Cloning, Expression, Crystallization and Characterization of a Novel 6Phosphoglucosidase from Thermoanaerobacter tengcongensis * YIN Jie,LIU YiWei, LI Jie, MA YanHe, XIANG Hua, YAN Jin Hua, Geor e F GAO ( Institute of Microbiology, Chinese A cademy of Sciences, Bejiing 100101, China) Abstract 6Phospho lucosidase ( Pb L, EC 32186) catalyzes the hydrolysis of some kinds of phospho disaccharides imported by phosphoenolpyruvatedependent phosphotransferase system ( PEPPTS) . An open readin frame ( ORF TTE