蛋白质提取分离与结构鉴定技术.pdfVIP

维普资讯 第22卷第2期 长 春 中 医 药 大 学 学 报 V01．22 20O6年 6月 JournalofChangchunUniversityofTraditionalChineseMedicine 2．20D6 蛋白质提取分离和结构鉴定技术 邵 帅，指导 ：曲晓波 (长春中医药大学2003级硕士研究生，吉林 长春 130117) 关键词 ：蛋 白质 ；提取分离；结构鉴定 中图分类号 ：R927 文献标识码：A 文章编号：1007—4813(2oo6)02—0082—02 蛋白质是生物体中含量最高，功能最重要的生 中-2]。②超滤法：以压差为驱动力的分离技术，可 物大分子。作为生命 的物质基础之一，蛋白质在催 分离 3O0～1000KD的可溶性生物大分子物质。樊晶 化生命体内各种反应，调节代谢，抵御外来物质入 等应用萃取 一超滤两步法从过期人血 中提取人血红 侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用。 蛋 白引。 因此，蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。 1．2．3 根据蛋白质带电性质不 同的纯化方法 ①离 本文针对近年来有关蛋白质提取分离纯化和结构鉴 子交换：最适用于早期纯化阶段。一般情况下，粗 定技术所取得 的进展作简要综述。 胶粒的离子交换剂用在提纯的前面步骤 中，高分辨 1 蛋 白质提取分离纯化技术 率的离子交换剂则用在纯化 的后面步骤 中 J。② 电 1．1 提取方法 泳法 ：常用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳 ，毛细管 电泳 1．1．1 水溶液提取法 缓 冲溶液对蛋 白质稳定性 在纯化蛋白的方面也得到 了很好 的应用 J。③等 电 好 ，溶解度大 ，是提取蛋白质常用溶液。 点沉淀法：大部分蛋 白质在其它pH下溶解 的但在 1．1．2 有机溶剂提取 一些和脂质结合较牢 固或分 其等电点时均沉淀，该法可用作一般粗制 品的纯化。 子中非极性侧链较多的蛋 白质和酶。可用丙酮等有 1．2．4 根据生物功能专一性 的纯化方法 亲和层 机溶剂提取。 ‘ 析：分离蛋 白质的一种极为有效的方法，利用该法 1．2 分离纯化方法 从粗提液中经过一次简单 的处理便可得到所需的高 1．2．1 根据蛋 白质溶解度不同的纯化方法 ①盐析 浓度活性物质 J。 法 ：一般粗抽提物常用该法进行粗分。②有机溶剂 1．2．5 置换层析 一种非线性层析技术 ，与传统的 沉淀法 ：该法沉淀蛋 白质分辨力高且溶剂易除去， 洗脱层析技术相 比有着明显优点，即高上样量 ，高 但因其易使蛋 白质变性，故操作条件较严格。③聚 产率 ，高分辨率 ，以及被分离样品在分离过程 中的 乙二醇沉淀法 ：聚 乙二醇等水溶液非离子型聚合物 浓缩效应。这一技术 已越来越引起人们的关注-7J。 可使蛋 白质发生沉淀，分子量在 400～6000Da之间 1．2．6 反相高效液相色谱 被广泛应用于分子量不 的聚乙二醇沉淀效果最好uJ。④疏水层析：近年发 大的蛋 白质分离、纯化和鉴定上 ，所使用 的 RPLC 展的新方法 ，常用硫酸铵沉淀、离子交换和亲和层 约95％是 C18反相硅胶 HPLC-8J。 析之后 ，进行疏水层析的样品不需要透析、凝胶过 1．2．7 大孔吸附树脂法 一类新型非离子型具有大 滤等方式脱盐。 孔结构的高分子化合物，具有吸附和筛选性能，容 1．2．2 根据蛋 白质分子大小不同的纯化方