川芎内生真菌的分离和鉴定.pdfVIP

川芎内生真菌的分离与鉴定 汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光 成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075 ） E-mail ：wangyangli27@163.com 摘 要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法：采用平板分离法分 离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果：从6个产地的川芎根茎样 品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3 目、4科、13属。结论：不同产地及 不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和 川芎内生真菌种群有关。 关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定 川芎为伞形科（Umbelliferae ）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort. ）的干燥根 茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。四川都江、彭州为川芎的主 要产区。此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎” 、“西芎” 、“抚 芎”[1～3] [4] 。有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多 ，但 至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。根据内生真菌和植 物互惠共生的关系[5，6] ，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎 在特定生境中的微生物群落结构的特征。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 植物来源（见表 1） 1.1.2 培养基 PDA 培养基[7] [8] （马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液 （用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH PO 1g、KNO 1g、MgSO .7H O 0.5g、KCl 0.5g 、淀粉 0.2g、葡 2 4 3 4 2 萄糖 0.2g 、蔗糖 0.2g 、琼脂 15～20g 、蒸馏水 1000ml 、PH 自然) 。 表 1 各种川芎的样品情况 药材名 原植物 部 位 采集地 采集时间 川 芎 Ligusticum chuanxiong Hort. 根 茎 四川 彭州 敖平 2006.5.20 川 芎 L. chuanxiong Hort. 根 茎 四川 都江堰 石羊 2006.5.22 山川芎 L. chuanxiong Hort. 根 茎 四川 彭州 小鱼 2006.7.24 山川芎 L. chuanxiong Hort. 根 茎 四川 汶川 水磨 2006.8.10 西 芎 L. sinense Oliv. 根 茎 甘肃 平凉市 华亭马峡 2006.9.14 云 芎 L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong 根 茎 云南 丽江 泸沽湖 2006.8.17 注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定 1.2 方法 1.2.1. 内生真菌的分离 先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的 NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下， 用75 ％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削 去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个 样品6个培养皿，置28 ℃恒