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2017-08-07 发布于安徽
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采用蛋白质组学技术筛选大肠癌转移相关蛋白.pdf

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生物化学与生物物理进展 ,2006,33(5):485~491 ProgressinBiochemistryandBiophysics 采用蛋白质组学技术筛选大肠癌转移相关蛋白* 赵亮刘莉王爽李祖国丁彦青** (南方医科大学病理学教研室，教育部和广东省共建重大疾病转录组学与功能蛋白质组学重点实验室，广东省分子肿瘤病理重点实验室，广州 510515) 摘要采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析，并在蛋白质和mRNA水平进行验证，成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白，其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1，磷脂酰乙醇胺结合蛋白和高迁移率族蛋白B-1，而热休克蛋白27，膜联蛋白，甲硫腺苷磷酸化酶，切丝蛋 Ⅰ 白1和表皮型脂肪酸结合蛋白在SW620中表达下调.大多数差异蛋白质功能涉及肿瘤细胞生长、运动、粘附、凋亡等过程，研究结果为阐明大肠癌转移机制及寻找预测大肠癌转移的潜在标志物提供了理论依据. 关键词大肠癌，转移，蛋白质组，双向凝胶电泳学科分类号 Q50，Q51 大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，大肠癌转 20mmol/LTris，65mmol/LDTT，0.2%Bio-Lyte 移是患者的主要致死原因，因此，阐明肿瘤转移机 3/10两性电解质和1mmol/L苯甲磺酰氟)，超声处制及控制肿瘤转移是目前肿瘤研究的重大课题.肿理后，4℃15000 离心60min，改良Bradford法 g 瘤转移是一个复杂的多基因参与的多步骤过程，明测量蛋白质浓度，上清储存于 ℃冰箱备用. -80 确肿瘤转移相关基因及蛋白质的作用，筛选和鉴定 1.1.3双向电泳.按照ProteanIEFCell操作说明进肿瘤生物学标志物是肿瘤研究的最前沿领域和热点行.细胞总蛋白(700 g)与泡胀液混合至总体积 μ 之一，肿瘤蛋白质组技术为实现上述研究提供了可 350 l，室温被动泡胀 16h左右，等电聚焦设置 μ 靠的新技术.本研究应用蛋白质组技术比较了来自为：250V1h，500V1h，1000V1h，5000V 同一亲本，具有不同的转移潜能SW480和SW620 3h及70000Vh，完毕后分别在含1%DTT的平衡人大肠腺癌细胞株的蛋白质表达谱，鉴定出一些大液和含 2.5%碘乙酰胺的平衡液中平衡各 Ⅰ Ⅱ 肠癌转移相关蛋白，为寻找大肠癌转移潜在标志物 15min，第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS) 及阐明大肠癌转移机制提供了有价值的理论基础. 采用浓度为 13%的均一胶，起始电流 12mA， 30min后48mA至溴酚兰到底，电泳后用考马斯 1 材料与方法亮蓝G-250进行染色. 1.1 高低转移细胞系的双向电泳分离 1.1.4 凝胶成像及图像分析 .利用 UMAX 1.1.1细胞培养.所采用的人大肠癌高转移细胞株 Power