生物反应器的操作.docVIP

综合实训一 生物反应器的操作 目的要求： 掌握机械搅拌通风发酵罐的基本结构 发酵罐主体 蒸汽灭菌系统：正确把握各阀门的操作 通气系统 加热冷却循环系统：各管道联络关系 搅拌动力系统 智能控制系统 掌握发酵罐小试的基本操作，包括：培养基配制，灭菌，接种，参数设定 掌握发酵过程中的参数测定和在线控制，包括：pH，DO，温度，搅拌速度，生物量，残糖含量，产物生成量，消泡，CO2。 运用所学知识分析发酵过程中的实验数据，讨论某一特定菌株的发酵规律。 二、 实验试剂和仪器 1、解脂假丝酵母AS2.1379培养基的配制 培养温度：30℃ 培养时间：2天 （1）种子培养基(100ml)：蔗糖2.0g, 蛋白胨0.5g,NaCl 0.2g, K2HPO4 0.2g,酵母浸膏0.5g； (2)发酵培养基：(%,W/V): 豆油4.0,全脂豆粉4.0,K2HPO4 0.1, KH2PO4 0.1. 2、主要试剂和原料 菜籽油、橄榄油、玉米油、叔丁醇、甲醇、NaOH、CuSO4 3、仪器 分光光度计、CRYOBANKTM菌种保存管、摇床、电子天平、恒温培养箱、超净实验台、离心机、50ml锥形瓶、培养皿、离心管、移液管、滴管、烧杯等 三、实验步骤 1、发酵罐操作步骤： （一）了解机械搅拌通分发酵罐的基本结构 （1）．罐体 （2）．发酵罐的搅拌系统 （3）．空气供给系统 （4）．温度控制系统 （5）．pH控制系统 （6）．过程变量的测量 （7）．灭菌系统 （二）生物过程灭菌与发酵过程的操作 1、灭菌操作过程 2、发酵过程操作 （三）测量与控制系统 2、具体操作过程 1）. 了解机械搅拌通分发酵罐的基本结构 2）. 培养基的配制 3）. 装料、灭菌 4）. 溶氧电极“0”的标定 灭菌完毕，此时发酵罐中为100％水蒸气分压，标定溶氧为“0” 5）. 降温冷却 6）. 取样操作 旋松放料口螺旋阀门（开启方向与正常螺旋相反），打开取样阀，先弃掉约20-30mL样液（为什么？），再收集30-50mL灭菌培养基液体，关闭放料阀、取样阀、样液用已灭菌的4层纱布过滤样液（4℃冰箱保存），样液作用测定用。 7）. 接种 当罐温降低至40℃以下时，采用火圈法接种摇瓶种子100mL。 火圈法接种：当各测量参数显示正常定，就可进行接种准备合格的摇床菌种酒精盘内入无水酒精酒精，点燃接种口，适当打开接种盖，将其放入将菌种瓶口放在火焰上烧一，并在火焰拔下瓶塞将菌种入发酵罐接种盖放在火焰上烧一盖上接种盖按工艺要求恢复罐压通气量。 3