快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立.pdfVIP

安徽科技学院学报，2014，28(6)：5～9 of JournalAnhuiScienceand Technology University 快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立 赵磊，王旋，龚争，吴章青，张训海+ (安徽科技学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室，安徽凤阳233100) 摘要：为建立快速诊断小鹅瘟的PCR方法，根据已发表的GP、，主要结构蛋白VP3基因序列，经多序列 6．0软件分析设计特异性PCR引物。以微量法提取病鹅肝组织DNA，优化PCR反应引物退 比对和Oligo 火温度、循环次数和鉴定其特异性，并与酚氯仿法和煮沸法进行同步对比研究。结果显示，建立的PCR检 测方法能够特异性检测病鹅肝组织中GPV的核酸，其扩增片段大小为343bp，最佳退火温度为58℃，最佳 循环次数为35次。微量法提取的病毒核酸PCR检测灵敏度分别是酚氯仿法的50倍和煮沸法的2500 倍。该PCR检测方法不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒以及健康鹅肝组织发 生交叉反应。本研究建立的GPVPCR检测方法能够快速诊断小鹅瘟。