废水生物处理新发展.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 利用分子生物方法可以原位研究废水生物处理过程中微生物群落的组成，跟踪活性污泥中一些起关键作用的微生物，为我们提供有关活性污泥中微生物种群的基因信息。这对于深刻理解废水生物处理的原理、提高处理系统的性能以及开发新的处理工艺极为重要。 2001-12- 8 为更好地理解环境工程中微生物的作用，应充分应用现代分子生物学方法，除基因组学（genomics）外，还需使用： transcriptomics－研究mRNA，基因表达的指示物 proteomics－与细胞功能相关的蛋白质的鉴定、表征、定量 metabolomics－研究代谢途径及代谢中间产物 2001-12- 8 有效应用分子生物学方法评价废水生物处理过程，有几个 方面需要注意： （1）分子生物学方法作为一种现代分析技术，可以为我们提供利用传统方法不能得到的关于微生物种群结构及功能等方面的详细信息。但限于目前的水平，该方法还很难应用于废水处理厂的日常检测； （2）传统的测量指标，如BOD、VSS、TKN等是必需的，因为它们可以反映废水中污染物的特性以及处理效果； （3）分子生物学方法只是传统分析方法的重要补充，而不能取代它们。这两种方法相互结合、相互补充，可以为我们提供废水生物处理过程的全方位信息。 Return 2001-12- 8 随着经济的迅猛发展，环境污染现状依然严峻，并有加剧的趋势。近年来，我国环境污染治理力度不断加大，进入了一个新的高速发展时期，对环境污染治理新技术的要求日益迫切。 随着现代生物技术的发展，尤其是分子生物学技术的出现，为环境学科的发展带来了新的机遇。 环境生物技术是一种经济效益和环境效益俱佳的、解决复杂环境污染问题的有效手段，是当代环境学科研究发展的主导方向之一，必将在环境污染治理中发挥重要作用。 2001-12- 8 2001-12- 8 * * * * * * * * * * * * * * * * 目的基因和载体重组并进入宿主后，并非能全部按照预先设计的方式重组，由于操作的失误及不可预测因素的干扰等，真正获得目的基因并能有效表达的克隆子一般来说只是一小部分，而绝大部分仍是原来的受体细胞，或者是不含目的基因的克隆子，为了从处理后的大量受体细胞中分离出真正的克隆子，目前已建立起一系列筛选和鉴定的方法。 * * * * * * * * * * * 2001-12- 8 核酸杂交试验并不要求探针与目标核酸序列之间百分之百地互补。有限数目的非互补碱基对的存在是可以接受的。 互补的单链核苷酸分子经退火形成核酸双链分子的过程是可逆的。因此，可以通过改变反应的物理和化学环境（条件）从而增加核酸双链分子生成的速度、程度及其稳定性。 影响两段互补核苷酸链杂交的因素包括：杂交和洗膜的温度、杂交时间、离子强度、甲酰胺浓度、碱基对之间非互补的程度以及探针分子和靶核酸序列的长度、复杂性和浓度等。 核酸杂交技术研究环境微生物具有以下优点： （1）核酸可以直接从样品中提取，不必对微生物进行培养； （2）不管基因表达与否，都可以检测到特定的基因或核酸序列，从而能准确地跟踪、监测特定的微生物种群； （3）利用同一样品可以同时检测到众多不同的微生物类群； （4）可以直接检测到特定的核酸序列。 2001-12- 8 2001-12- 8 核酸杂交技术应用于环境微生物研究的一个重要局限就是它要比传统的方法复杂得多。 （1）从各种环境样品中提取核酸本身就包含众多繁冗的抽提和纯化操作，因此也是最复杂的步骤之一； （2）从富含能干扰核酸检测的污染物的样品（如土壤）中回收核酸，仍有待用一些特殊的技巧对现行的有关方法加以改善； （3）对任何一个自然微生物群落的研究常常需要对其多个平行样品进行分析和统计； （4）从水样等样品中检测以很低丰度存在的、或在整个微生物群落中仅占很小比例的微生物类群，核酸杂交技术的灵敏度尚需大幅度提高。 2001-12- 8 核酸杂交技术的一个缺点是只有对已被分离并已测序的微生物才能够放心使用。 微生物生态学家估计，到目前为止，在自然界中只有少数微生物能够被分离、培养。此外，被分离的微生物也可能并不能很好地代表自然环境中最重要的微生物。 无论微生物是否已被分离或已完成测序，具有能提供微生物群落多样性指纹信息的分子技术是非常有用的。 2001-12- 8 2001-12- 8 变性梯度凝胶电泳法（DGGE