致鸡急性肉瘤组织细胞提取液的泛嗜性及研究.pdfVIP

致鸡急性肉瘤组织细胞提取液的泛嗜性研究 刘绍琼1·，唐德宏2·，王波1，王健1，王晓1，马藤菲1，崔治中lT张永光3，孙淑红26 (1山东农业大学动物医学院，泰安271018；2泰安市动物疾病预防控制中心，泰安271000； 3中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州730046) 摘要：本研究通过对致鸡急性肉瘤SDl005分离株在不同品系、不同日龄鸡只的人工致病性试验，探讨了其泛嗜性。山 东某地饲养的36日龄817肉杂鸡发生急性肉瘤，取肉瘤组织细胞提取液接种CEF进行细胞培养，同时人工感染1日龄817肉 杂鸡，海兰褐蛋鸡与白羽肉鸡．白来航系SPF鸡等4个品系鸡，结果均复制出同样肉瘤。将复制出的新鲜肉瘤分别制备肉瘤 细胞、组织切片与培养12d的细胞飞片同时用IFA试验进行病毒鉴定，结果从肉瘤组织中分离到A亚型禽白血病病毒(ALV—A)、 果显示肉瘤形成与接种部分密切相关。对不同日龄817肉杂鸡致瘤性结果显示肉瘤发生率对感染日龄有较强的依赖性。本研 究显示，来自817肉杂鸡的SDl 同品系、不同日龄鸡均可诱发急性内瘤。但急性肉瘤由不同种病毒诱发还是与多种病毒共感染相关有待于进一步研究。 关键词：急性肉瘤；A亚型、J亚型禽白血病病毒和禽网状内皮增生病病毒；共感染；泛嗜性 leukosiS 禽白血病病毒(Avain virus， REV)均能够引起禽类(主要是鸡)各种恶性肿瘤、免疫抑制等，导致机体免疫能力下降，并继发感染其他 疾病，这给养鸡业造成严重损失。在过去十年中，我国鸡群中ALV与REV的感染及其共感染已有大量的报 同一只急性肿瘤发病鸡中发现A亚型ALV(ALV-A)、ALV-J与REV共感染的报道。 817肉杂鸡作为白羽肉鸡的父母代父系公鸡与商品代褐壳蛋鸡的杂交后代，是山东省农业科学院研发的 肉用品种，具有生长周期快(饲养周期45-50d)、饲料转化率高的特点，目前在山东省的市场范围逐步扩大， 但同样存在着肿瘤病日益严重的问题。2010年5月，山东某地的817肉杂鸡生长迟缓并发生颈部肉瘤。本 研究采集肉瘤组织进行了ALV与REV的分离鉴定，同时取肉瘤组织细胞提取液对不同品系、不同日龄的鸡 只进行了致病性研究，以探讨该急性肉瘤对实际生产的危害性。 1材料和方法 1．1 ALV-A的MAb和REV的MAb 小鼠IgG、罗丹明标记的羊抗鸡Igg均购自上海史瑞克科技有限公司。其他常规试剂均为国产分析纯。 1．2实验动物817肉杂鸡，海兰褐蛋鸡，白羽肉鸡，SPF鸡等4个品系鸡若干只，随机采集各品系鸡10 份血清检测，结果显示ALV—AB、ALV—J及REV抗体阴性。 1．3病料来源及处理山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡颈部发生急性肉瘤，取肉瘤组织加入5倍体积 u 的PBS进行研磨，4℃离心取上清液，用0．22m的滤膜过滤制备肉瘤组织细胞提取液，分装后-80。C保存 待用。 培养箱中培养2h，换入含1％小牛血清的细胞维持液，培养5d，然后将培养的细胞传于加有盖玻片(飞片) 的平皿中，继续培养7d，固定飞片后备用。 1．5复制出的肉癌组织中病毒的分离培养将肉瘤组织细胞提取液接种1日龄的817肉杂鸡，复制出同样 肉瘤。 作者简介：+刘绍琼(1987年．)，女，山东章丘人，硕士研究生，E-mail：liushaoqion91987@163．corn； ’唐德宏(1967年．)，女．江苏扬州人，高级兽医师，E-maih taagdh607@163．com．二人共为同等贡献作者 ·——347·—— 锥口％eolld博药大会——§Em生物学、冉医』r物捌6＆学学术论坛葩文蜓(2012‘I 1 5 cEF)。 l肉痛细胞的制各无茼取复制出的新鲜肉谢H【纵．制箝单层肉瘤细胞培养物(制各方法14 凼定飞片后备刚。 1 52嘲癖组织石蜡切片的制蔷采集新鲜的肉瘤组纵及肝IIfl!、脾脏、腺胃等】￡它病变组织，在10％福尔 马林液中阑定48h．冲水过夜后簧J：75％的涌精中．按常规古法将4【织脱水