2013高考生物复习课件 专题1 1.2 基因工程的基本操作程序.pptVIP

特别提醒 ①用限制酶切割载体和含目的基因的DNA分子时，可以使用不同的限制性核酸内切酶,但是必须切出相同黏性末端。 ②不同基因可以拼接的原因：不同生物的基因具有相同的结构和化学组成，都是双螺旋结构，都由四种脱氧核糖核苷酸组成，都遵循相同的碱基互补配对原则：A—T，G—C。 2．目的基因的导入 (1)不同受体细胞的常用导入方法 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 (2)目的基因导入受体细胞 ①不同生物的受体细胞不同：植物一般为体细胞，动物一般为受精卵，微生物一般为大肠杆菌。 ②上图中发生②与发生①相比，②会使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，原因是在进行细胞分裂时，细胞核上的DNA经复制后平均分配到两个子细胞中，保证了亲子代遗传性状的稳定性，而①细胞分裂时，细胞质是不均分的，子细胞不一定含有目的基因。 (2011年高考海南卷)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。 例2 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是____________________________。 在表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成________，常用抗原—抗体杂交技术。 (3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。 【尝试解答】(1)平　相同　(2)RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质　Ca2＋　DNA分子杂交技术　人胰岛素 (3)T－DNA　染色体的DNA 【解析】(1)限制酶能识别特定的DNA序列，并在特定位点上切割DNA，形成黏性末端或平末端；要使目的基因和质粒直接进行连接，应使用同一种限制酶进行切割，使二者产生相同的黏性末端。(2)启动子为DNA序列，其具有RNA聚合酶结合位点，能启动转录，合成RNA；将基因表达载体导入大肠杆菌时，常用Ca2＋ 处理；检测目的基因时，常用 分子杂交技术检测目的基因或相应的mRNA，或采用抗原—抗体杂交技术鉴定相应的蛋白质。(3)用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，首先将目的基因导入农杆菌Ti质粒的T－DNA中，再利用农杆菌侵染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上。 【误区警示】　(1)切割质粒和目的基因的限制酶必需是同一种酶，以获得互补的末端，利于重组质粒的构建。 (2)目的基因的首端和尾端需加上启动子和终止子。 组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 (3)由于受体细胞有植物、动物、微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此，基因表达载体的构建也会有所差别，不可能是千篇一律的。 跟踪训练　(2011年江苏无锡高二检测)如图为基因表达载体的模式图，下列有关基因工程中载体的说法错误的是(　　) A．基因工程的核心步骤是基因表达载体构建 B．任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别 C．图中启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位 D．抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因 答案：B 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 返回 1．2　基因工程的基本操作程序 课标领航 1．阐述基因工程的原理。 2．掌握并理解基因工程的基本操作程序。 3．尝试设计某一转基因生物的研制过程。 【重点】　基因工程的原理及基本操作程序。 【难点】　基因文库；PCK扩增过程；目的基因的检