尿嘧啶DNA糖苷酶活性电泳凝胶成像分析测定.pdfVIP

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2015-07-20 发布于安徽
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尿嘧啶DNA糖苷酶活性电泳凝胶成像分析测定.pdf

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第卷第期 Voi .20 No .2 20 2 年月 Mar . 2004 BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY 2 0 0 4 3 尿嘧啶DNA 糖苷酶活性的电泳凝胶成像分析测定， 1 2 3 2 陈朝银，刘丽，贲昆龙! （昆明理工大学生物工程系，昆明；中国科学院研究生院昆明动物研究所，昆明； 1. 650224 2 . 650223 3 . 华南农业大学动物科技学院，广州510642 ）摘要：尿嘧啶糖苷酶（）是防止假阳性反应的工具酶，参照限制性内切酶活力测定法的原理 DNA UNG PCR DNA （以完全消化DNA 带型的最高稀释度为一个活性单位）和应用凝胶成像分析技术，建立了UNG 酶活性的非同位素检测新方法反应体积为，底物（）为，加后在适当温度下反应，使底物去除尿 . 20 L dU-ung dU-DNA 165 g UNG 10 min ! ! 嘧啶，其位点经碱降解通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析，测定底物的残留量以测定酶活性 AP . dU-ung UNG . 酶活力以每分钟降解的酶量为一个单位，检测灵敏度为，检测线性范围为该法简便 37 C 1 ng dU-ung 1 ng 0 ~ 165 ng . 易行、客观、精密，重复性好（），结果显示直观 CV 3% . 关键词：生物化学；尿嘧啶糖苷酶（）；酶活性；电泳凝胶成像分析；酶活性测定 DNA UNG