日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体的构建表达和初步鉴定.pdfVIP

ChinSchistoControl 中国血吸虫病防治杂志2005年第17卷第4期J 2005，V01．17，No．4·241· [文章编号]1005—6661(2005)04—0241—05 ·论著· 日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单 特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定 朱 毅1，朱 进2，冯振卿H，徐璐1，李芸茜1，仇镇宁2，管晓虹2 [摘要] 目的 构建和表达日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体，并初步 鉴定表达产物活性。方法 应用SOE法扩增双链抗体基因Vw—linker—VL(Diabody，简称D)。将D重 组入原核表达载体pBAD／gⅢ。表达质粒转化E．coliTOPIO，左旋阿拉伯糖诱导表达。对D的表达 产物进行分离纯化，采用Dot—ELISA法检测纯化蛋白与NP30、可溶性虫卵抗原(SEA)、可溶性成虫 抗原(SWAP)的结合活性。结果测序证实双链抗体基因D构建成功；构建了D的原核表达系统， 诱导表达产物主要以包涵体形式存在，分子量约为27kD；经纯化、变性复性后用Dot—ELISA法鉴 定结果表明，D表达的纯化蛋白可与NP30特异性结合。结论所构建、表达的NP48单特异性双链 抗体具有亲本单抗的部分特性。 [关键词] 日本血吸虫；抗抗独特型抗体；双链抗体；蛋白表达；Dot—ELISA [中圈分类号]R383．24[文献标识码]A andcharacterizationofa Construction，expression mono—spe- cificbivalent derivedfroman mort- diabody anti--anti--idiotypic oclonal NP48ofSchistosoma Zh“Yi·，Zh“ antibody japonicum Lul，Li (1 of Jin2，FengZhenqin91，XuYunqianl，QiuZhennin92，GuanXiaohon92Department Medical ResearchCenterNanometer 210029，China；2 of Pathology，NanjingUniversity，Nanjing Medical Technology，NanjingUniversity，China) Toconstructa bivalent derived [Abstract]Objective mono—specificdiabody(scFvdimer)gene froman ofSchistosomaand and monoclonalNP48 to anti--anti——idiotypicantibody japonicumexpress characterizethe The constructedSOE protein．Methodsmono-specificdiabodygene(D)wasby asalinkertO theC—terminusofthe tOthe byoverlapextension)andusingGly4Set join VH (splicing N-termin