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科 学发展 聚乙二 蛋白质多肽类药物研究综述 郭会灿 石家庄职业技术学院化学工程系 摘 要：本文对聚乙二醇修饰蛋白质多肽类药物的原理、意义、方法及应用等方面进行综述。 关键词：蛋白质多肽类药物；PEG修饰 长期以来，蛋白质多肽类药物的应用价值是医药界的研究重点。由于消 苯碳酸酯、PEG-苯并三唑碳酸酯、PEG．氧羰基咪唑等。其中用羟基琥珀酰亚 化系统的破坏，蛋白质多肽类药物 口服后几乎不能吸收，即便是注射，也因 胺法活化的PEG应用广泛。 为高的肾清除率和易被蛋白质水解酶水解而使药动学指标很差。同时这类 2、羧基的修饰 药物具有潜在的免疫原性，以及本身的不稳定性，这些因素使得此类药物在 羧基的修饰位点包括天冬氨酸、谷氨酸及末端羧基。一般在二环己基二 应用 中受到限制。 亚胺或1．乙基．3．二 甲氨基丙基．碳二亚胺盐酸盐存在下，羧基可与氨基PEG 为了解决蛋 白质多肽类药物的给药问题，各国研究者尝试了很多方法， 结合，但 同时也容易发生其他交联反应 。 其中化学修饰技术以其灵活多样、简单易行的特点得到了较为广泛的应用。 3、巯基的修饰 提高蛋白质多肽类药物在体内的稳定性和延长药物在体内的存留时间最为 蛋白质分子游离氨基较多，其修饰多为随机修饰，修饰后易造成蛋白质 修饰成功的方法是在其分子表面共价结合聚乙二醇 PEG ，[1pPEG修饰。由 活性的损失和最终产品的不均一。巯基在蛋白质组成中通常含量不高，位置 于PEG的无毒性及 良好的生物相容性和血液相容性，使之成为一种被广泛 确定，因而可针对那些对活性影响不大、呈游离状态的巯基，进行定量、定点 应用的生物修饰材料，也是被FDA批准的极少数能作为体内注射药用的合 修饰。目前可用于巯基修饰的活化PEG主要有PEG一邻一吡啶．二硫醚、PEG-马 成聚合物之一。 来酰亚胺、PEG．乙烯基砜、PEG．碘乙酰胺。其中PEG-马来酰亚胺活化相对 一 、 聚乙二醇修饰的原理和意义 简单，应用较多。 蛋白质多肽类药物的聚乙二醇修饰是指PEG与蛋白质多肽分子的非必 4、三种PEG修饰方法的比较 需基团共价结合，作为一种屏障挡住蛋白质分子表面的抗原决定簇，避免抗 方法 修t6I位点 优点 缺点 体的产生，或者阻止抗原与抗体的结合从而抑制免疫反应的发生，从而提高 较高 的亲核厦应活 置 白虚分子中游离的氨基较 蛋白质多肽药物的生物利用度。 修饰氨基 分子表面赖氨酸残 性 ，是置 白质化学修 多，随机修怖 ．修饰后易造成 基上的氨基 饰中最常被修tII的基 置 白质洁性的损失和最终产 蛋白质多肽类药物经PEG修饰后，具有以下突出的优点。 团 晶的不均一 1 PEGASS：身的免疫原性极低，当与蛋白质非活性部位的基团结合时，能 置白质 中遥常含量不 屏蔽挡住蛋白质的抗原决定簇，蛋白质多肽类药物作为外源物质不能被识 修饰巯基 巯基 高，位置确定 ，可进 修饰事低 行定量、定 点幡饰 别，避免了抗体的产生。 修饰臻基 天冬氨酸、咎氨艟及 反应温和 易产生苴他的交联反应 2 PEG与蛋白质多肽类药物结合后，使蛋白质不易被蛋白酶降解，从而 末端羧基 延长体 内的作用时间。 四、PEG修饰蛋白质多肽的分析方法 3 PEG．蛋白质结合物的免疫原性大大降低，难以激发抗体的产生，从 在PEG修饰药物的分析中，至少有三方面内容：药物的平均修饰度； 而不会通过免疫反应被清除。 PEG修饰的特定位点及特定位点的修饰程度；偶联不同个数PEG药物的相 4 PEG修饰蛋白质后，蛋白质分子质量增加，不易被肾脏代谢，在血液 对含量。 的停留时间延长，半衰期延长。 蛋白质多肽的平均修饰度即每个偶合物上平均偶联的修饰剂分子个 二、PEG修饰过程设计 数。平均修饰度的测定方法常采用光度法，由于干扰因素较多，分析前应分 影响PEG修饰过程的主要因素有：蛋白质浓度、蛋白质与PEG修饰剂物 离纯化。PEG化程度的检测还可用凝胶渗透层析、毛细管电泳、十二烷基磺 质的量的比、修饰反应的pH和离子浓度、修饰反应温度、修饰反应持续时间 酸钠。聚丙烯酰胺凝胶电泳法、质谱法等。 等。通过实验设计，可以得到适宜的修饰反应条件。 修饰位点的辨识是根据偶合物分步降解过程中释放的氨基酸的分析来 在典型的液相PEG修饰反应中，蛋 白质与PEG的摩尔比一般为1： 进行。 3～5 ，反应pH维持在7～8之间，温度保持在4—8℃，反应持续8—16h，然后用 偶联不同个数PEG药物的相对含量即偶合物的均一性，可 以通过凝胶 冰醋酸调节pH 4．5来终止反应。反应混合物用水稀释后在阳离子交换柱上 过滤色谱、质谱、毛细管电泳等方法确定。 进行吸附分离，将剩余的PEG和反应副产物洗掉。修饰蛋白和未修饰的蛋白 五、现有的PEG修饰蛋白