荧光素和牛血清蛋白荧光光谱的研究.pdfVIP

维普资讯 仪《器仪表与分析监测) 2002年第 1期 荧光素与牛血清蛋白荧光光谱的研究 宋功武 荧光素与牛血清蛋白荧光光谱的研究’ 宋功武 刘立明 方光荣 李玲 王小妍 (湖北大学分析测试中心 湖北武汉 430062) 摘 要 根据荧光素的单体一：聚体平衡转化的原理，本文报道 了一种检测蛋白质的方法。荧 光素在表面活性荆作用下形成二聚体后荧光强度明显降低，加入蛋白质后二聚体解聚荧光强度增加。 这种方法简便，灵敏度高。 关键词 二聚体 荧光素 牛血清蛋白 蛋白质的定量是生物化学、临床医学和食品检 光激发，在波长 515nm处测定发射光强度，同时作 验等最常涉及的内容 。有关蛋白质的荧光光谱分析 试剂空 白实验。 研究 已有报道 一31。荧光染料应用于蛋 白质定量 2 结果与讨论 分析是近年来逐渐兴起的方法H0J。荧光素随着 表面活性剂CFBA的加入形成二聚体，但蛋 白质的 2．1 吸收光谱 加入使二聚体发生解聚。本文利用此方法定量测定 荧光本身的最大吸收峰 495nrn处 ，随着表面活 牛血清蛋白和人血清蛋白样品，结果令人满意 性剂 CTAB的加入 ，最大吸收峰红移到 500nm处 ， 峰高随着crAB的浓度的增大而增大。 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 一 17紫外可见分光光度计(美国P—E公司)； RF一540荧光分光光度计(日本) PHB一4pH计(上海雷磁仪器厂)； 荧光素溶液：lX10_。。mol／L； 牛血清蛋白(tLSA)：100mg／L(-[B京百泰生化技 术公司生化试剂)使用时稀释到所需的含量 ： 十六烷基三 甲基演化胺 (CTAB)溶液：lx10-3 otol／L 40042(1440 460 4gD 500 521(5．10560 580 600 砬O 缓冲溶液为Tris(--羟 甲基氨基甲烷)：0．5otol／ ^／nm I 图 【荧光寨与CIAB的畈收光谱 氯化钠溶液：0．1mol／L。 Cr=1．5×l0 mol／L c【^B=l×l0 m0l／L 所用试剂均为分析纯 ，实验用水为二次蒸馏水 。 1 荧光素+CTAB~ 2、3 荧光素+CTAB+BSA 2．2 荧光光谱 1．2 实验方法 荧光素的荧光光谱在515rim( ：329nm)处， 移取 1．5mL lx10I4mol／L荧光素溶液置于 随着阳离子表面活性剂CTAB的加入，荧光素 自聚 10mI比色 管 中，加 入 1．0mL lx10—3oto!／L 成二聚体荧光强度明显降低 ，但蛋白质的加入可以 CTPJ3，加人0．5mol／I Tris 1．0mL，加人0．trod／ 使二聚体解聚，荧光强度回升，荧光强度的回升与蛋 L氯化钠溶液 0．5mL，加入一定量的BSA溶液，摇 白质的浓度成正比，据此拟定 测定蛋白质的方法 匀，甩水稀释到刻度，放置 5min后，用 329nm波长 · 中国分析测试基金资助课题 (99一I1) - 28 ·