纤维素酶产生菌的分离与鉴定.pdfVIP

维普资讯 第l7卷 第4l明 齐齐哈尔师范学院学报 (自然科学版) vo1．17 No．4 1997年 l1月 Journal of oiqil~r Teachers Collese(Natural Science) Nov． 1997 ③ f—e 纤维素酶产生菌的分离和鉴定 Q7；7Ij 张虹 李 宋秀英 刘军 孙剑秋 平文祥 1并 ：： 石 ．中)(齐市八中)(齐齐暗尔商校) (生 翱 幕) 摘要 利用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，从齐市糖厂弃渣塘的土样 中，分离 到 j一椿纤维素分解能 力报强的真菌 (QCF；)，根据彤态特征 ，可鉴定为绿色未霉 ( Tr~chod _苎 关键调 关键调纤维素垒解菌．，乏．分童离．鉴定．绿绿色色未未霉霉 纤lM程王素酶墨户厂生已萄J 纤维素是植物体内结构多糖 ，植物的枝叶和秸杆等都含有大量的纤维素． 自然界中的纤 维素，通过纤维素分解菌将其 自然分解 ，因此，挖掘这些微生物的资源，充分利用纤维素 ，将是 一 项有益的工作．本研究旨在 以富含有纤维素的生境中．进行分离分解纤维素菌的研 究，并对 其进行分类鉴定，确定其分类地位，为进一步进行遗传育种和开发利用奠定理论基础 ． 1 材料和方法 1．1 分离 I．1．I 采样地点和采样方法 从齐齐哈尔糖厂弃渣塘中进行采样 ；采样的方法 按文献 [I]中 介绍 的方法进行． I．I．2 分离所使用的选择培养基 KHPC)．I．0g；微 晶纤维素 10$；MgSO。．7H：O 0．5g；蛋 白 胨 1g；琼脂 22gH‘ 1000mL；孟加拉红 (1mg／mL)3．3mL：链霉素 (1万单位)3．3mL(临 用前加入)，自然 pH． 1．1．3 分离方法 参照文献C23的方法进行．称样品 】g，加入到一个盛有 99mL无菌水 带有 玻璃珠的三角瓶中．将样品充分打散 ．混匀，即成 】0 土壤稀释液 ．然后再按 】0倍稀释法 依次 稀释成 l0～、10～、10一、10 的土壤稀释液．然后甩无菌移液管分别 吸取 1mLt0一、t0一、10 的土壤稀释液于相应编号的无菌培养皿内．用上述选择培养基制成平板 (每一梯度倒 8Int)．待 冷凝后，将平板倒置于 28C的恒温箱中培养，从第 3天开始注意观察菌的生长情况． I．2 纤维素分解能力的测定和纤维素分解能力强的菌株的选择 I．2．1 初筛 用游标卡尺测量菌落周围水解圈的直径和菌落直径 ，并以两者的比值大小作为 初步判断分解能力的指标，将 比值较大的菌落挑取至选择培养基的斜面管中，目作进一步进行 产酶水平 的测定和纤维素酶高产菌株的筛选． 1·2·2 复筛 将初筛所得到的菌株在分离用选择培养基上进一步分离纯化后 ，用三点接种法 分别点种在选择培养基上 ，培养后进一步测定水解圈与菌落直径的比值，选 择生长速度快 (产 孢早)，比值较大且稳定 (与初筛相 比较)的菌株，用 DNS 定糖测定纤维素酶的产酶水平，选 出 纤维酶产生水平高 的菌株进行分类鉴定． 1．3 菌种的鉴定 根据文献 [1]、 ]和C53中介绍的方法和分类依据进行分类鉴定． I-3·I 鉴定用培养基 Czapek培养基和PDA培养基 ，两种培养基的配制方法见文献 [5]． 1·3·2 菌落形态特征 将所选出的产酶水平高的菌株 以三点接 种法分别接种在 CzapeK和 PDA培养基上，28℃下培养 3d后 ，用游标卡尺测定菌落的直径、菌落的高度；观察菌落的质 车文 1997年 9月 15日收到 ·齐齐哈尔市科委攻美项 日 维普资讯 第4期 张虹等：纤维紊酶产生菌的分离和鉴定 地、菌落的边缘 、菌落 的表面及纹饰 以及菌落