产淀粉酶芽孢杆菌高产菌株的筛选.pdfVIP

FUW I H 产淀粉酶芽孢杆菌高产菌株的筛选 。 。 。。 B10。 ．．TEcHN0LoGY I●， 唐丽江，王振华 ，王 迪 成都农业科技职业学院 畜牧兽医分院，成都 温江 611130 摘 要：试验选用 10株芽孢杆菌，对其产淀粉酶的能力进行了测定，测定方法分初选 染色法 和复选 3，5一 二硝基水杨酸显色法 两步。结果表明，其中9株菌具有产淀粉酶能力，以编号为Pab03、Pab02的两株枯草芽孢 杆菌的产酶活性最高，在未优化发酵条件的前提下，酶活力分别达到31．33l和21．521U，作为新型的消化酶饲料 添加剂显示出广阔的应用前景。 关键词：淀粉酶；芽孢杆菌 ． 中图分类号：$852．61+6；Q556+．2；Q814．1 文献标识码：A 文章编号：loo1-0084 2009 04—0023-02 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称，广泛用 其中枯草芽孢杆菌 BacillusSubtilis 6株：菌种编号 于酿酒、食品、医药、纺织、饲料等行业。由于芽 分别 为：PKCO1、PJK01、Pab01、Pab02、Pab03、 孢杆菌对动物独特的生物学效应，高产淀粉酶芽胞 Pab04；地衣芽孢杆菌 BacillusLichenifor—mis l株 ： 杆菌的研究已经在动物饲料方面取得了一定进展。 菌种编号：PSA06；蜡样芽孢杆菌 BacillusCereus 配合饲料中含有淀粉、蛋 白质、脂肪、纤维素、半 2株：菌种编号分别为：PSA38、PDM423；凝结芽孢 纤维素、果胶等多种营养成分，这些营养成分都是 杆菌 BacillusCoagulans l株：菌种编号为：PSAF1。 由生物多聚物组成的，必须依靠水解酶类将其酶 1．1．2 培养基配制 解，才能被动物肠道吸收。在饲料中起作用的淀粉 培养基按 以下 比例配制后 ，加蒸馏水调至 酶主要是 O／一淀粉酶和糖化酶 葡萄糖淀粉酶 ，O／一 100％。 淀粉酶是将大分子淀粉水解成中、小分子产物，从 淀粉培养基：可溶性淀粉 1％、蛋 白胨 1％、葡 非还原性末端开始，逐次切下能被动物直接吸收利 萄糖0．5％、NaC10．5％、牛肉膏0．5％、琼脂粉0．8％； 用的葡萄糖。芽孢杆菌作为饲料添加剂的优点是一 种子培养基：牛肉膏0．5％、蛋白胨 1％、NaC10．5％、 方面其产生的淀粉酶可促进饲料中含淀粉成分的降 可溶性淀粉 0．5％，pH7．0；发酵培养基 ：玉米粉 解，易被动物充分吸收利用，另一方面芽孢杆菌进 2％、黄豆饼粉 1．5％、CaC10．02％、MgSO40．02％、 入消化道能提高内源酶的活性。尤其在动物断奶初 NaC10．25％、K：HPO0．2％、柠檬酸钠 0．2％、硫酸 期，其体内淀粉酶等含量低，不能满足生长发育的 氨0．075％ 溶解后加入 、Na2HPO40．2％，pH7．0。 要求，若不及时补充淀粉酶 ，则会造成消化不 良， 1．1．3 主要试剂和溶液的配制 影响生长发育。所以高产淀粉酶芽孢杆菌的选育已 0．1％葡萄糖溶液：准确称取80℃烘干至恒重的 成为饲料行业一个新的研究热点。 无水葡萄糖0．1g，去离子水溶解后定容至100mL。 1 材料与方法 0．1％标准麦芽糖溶液 ：称取麦芽糖 100mg， 1．1 试验材料 用蒸馏水溶解并定容至 100mL。 1．1．1 选育菌种 l％的3，5一二硝基水杨酸试剂：精确称取 1g 均 由四川农业大学生物医学工程实验室提供。 3，5一二硝基水杨酸，溶于20mL2mol·L 氢氧化 钠溶液中，加入蒸馏水 50mL，再加入四水酒石酸 收稿El期：2009一O1一O6 钾钠 30g，待溶解后用蒸馏水定容至 100mL，盖 作者简介：唐丽江 1978一 ，女，四川成都人，硕士研究生，研 究方向为微生态制剂的开发与应用。 紧瓶塞，隔绝CO。 $通讯作者 E-mail：zhaowangzhenhua@s0hu．com 2％淀粉溶液 ：准确称取淀粉溶 2g于 100mL 2009年第4期 饲料博览技·术版 23 。 · 0． 1 m o lL H 5． 6 5 20 nm p 柠檬酸缓 冲溶液 中。 定容 、 摇 匀后 ， 用 分 光 光 度 计测 定 处 1 2 法 D ． 试 验 方 的 O 值 。 1 2 1 ． ． 初 选 在上 述 条件 下 ， 以单位体 积 样 品在 30 m in 释 将芽孢杆菌菌种 活化 ， 接种在 营养 肉汤 培养基 放 1 m g 麦 芽糖所 需 的酶量 为一 个 麦 芽糖单位 表示 中， 37 ℃ 培养 12 h， 芽孢杆 菌液用 滴种法 接种 在 酶活性 。 ～ 基 2 4