线粒体tRNA_Leu_UUR_基因突变糖尿病的基因诊断技术与临床意义.pdfVIP

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2015-07-21 发布于安徽
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线粒体tRNA_Leu_UUR_基因突变糖尿病的基因诊断技术与临床意义.pdf

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2000 222 2 ebei Medical Journal Feb 2000,Vol.2,No. 2 143 tRNALeu(UUR) 王战建李红刘宽芝庞建华杨锁印 , PCR tRNALeu(UUR) nt3243 AG 32 PCR PCR : 10PCR 5l, [ 1,2] , 2mM dNTP 5l, T-Leu-F ( 100pmo/l) 0.5l, T-leu-R ( 100pmol/ l)0.5l,Taq ( 5U/l) 0. 3l, DNA 1l( 0. 1g) dd O 50 l, 2 [3] 2.5%~ 11.0% ; ,PCR : 95 5 min , ,94 1min, 65 2min, 30 [4] PCR/ApaPCR/ ae, , ,7210 min tRNALeu(UUR) nt3243 A 33 : 10Apal 4l, 1 mg/ml : BSA 4l, 1% BME 1 l,Apal 40U, PCR 15l, 1 dd O 40l;37 2 18 , 8 , 10 34 12%, DNA-pGE -3zf ;(37.6 9.2) , 1985 (+ ) ac,100V, 4 h W O 35 0.5%20 min 2 ,, 21 PCR , 4 ,, , ApaI , tR- , NALeu(UUR) nt3243 AG 22 ( 1) : 100pM/1T-Leu-F(5-TTC ACA 206112 94bp [ Apa (+ )]; AAG CGC CTT CCC CC-3) ,T-Leu-R(5-CCA TTG CGA ,206 [Apa(- )], TTA GAA TGG GTA CA-3) ;(2)2 mmol/L dNTP, (3) 5U/ 1Taq ;(4)Apa I ; (5)NNNN- 18, (TEMED) ;( 6) 1mg/ml (BSA) ; , 1, (7) 1%( BME) ; (8) 12%; (9) 10 , , PCR, 10Apa I ; ( 10) 1TBE 5 ( p 8.3~ 8. 4) ; ( 11)0. 5%; ( 12) DNA , 3 , 31 / , DNA(mtDNA) DNA,DNA