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主要内容 第六节 条件突变株的应用 第七节 选育不生产副产物菌株 第八节 选育生产代谢拮抗物菌株 条件突变株的应用 突变：通过DNA中碱基变化（即一级结构的变化） 导致生物性状发生改变的现象。 条件突变：一种突变在一定条件下表现为野生表型，但在特殊条件下出现突变表型。 如：温度敏感性突变 抑制性突变 链霉素依赖性突变 低温敏感性突变 …… 温度敏感突变株 温度敏感突变株：在正常培养温度下，菌体生长良好，当温度提高到一定程度时（如30℃提高到40℃），停止生长，而只产酸的菌株。 典型应用：谷氨酸发酵 谷氨酸敏感突变株的突变位置是发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一个碱基所置换，这样由基因所指导释放出的酶，在高温下失活，导致细胞膜某些结构的改变。 谷氨酸发酵 正常情况下：谷氨酸产生菌的细胞膜不允谷氨酸细胞内渗透到细胞外，在发酵过程中，一般是通过控制生物素亚适量、添加 tween-60或青霉素等手段来调节细胞膜的渗透性，以使谷氨酸产生菌细胞膜允许谷氨酸从细胞内渗透到细胞外。 谷氨酸温度敏感突变株发酵：仅需通过转换培养温度就可以完成谷氨酸生产菌由生长型细胞向产酸型细胞的转变，避免了因原料影响而造成产酸不稳定的现象，且发酵稳定，发酵周期短，设备利用率高。另外生物素可以大过量，从而强化二氧化碳固定反应，提高糖酸转化率 温度敏感突变株发酵谷氨酸 关键点：A.控制好温度转换时间 B.适度的剩余生长 温度转换的最佳时间因菌株，接种量，培养基组成和发酵条件而异。转换时间不同，产酸显著变化。 在温度转换之后，必须进行适度的剩余生长，完成谷氨酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转变。剩余生长太多，意味着细胞未能进行有效的生理变化，剩余生长太少，意味着细胞没有机会完成这种转变。 选育不生产副产物菌株 1.有共用前体物的其他分支途径或目的产物是其他产物生物合成的前体物时，应附加营养缺陷型，切断其他分支途径或目的产物是其他产物生物合成的代谢流。 2.存在有目的产物分解途径时，应选育丧失目的产物分解酶的突变株。 3.当有副生产物，特别是有不利于目的产物精制的副生产物时，应设法切断副生产物的代谢流（丧失副生产物生物合成途径中的某个酶） 选育生产代谢拮抗物菌株 代谢拮抗物：与代谢产物结构相似，同样能与阻遏物以及变构酶相结合，可是它们往往不能代替正常的氨基酸而合成为蛋白质，它们在细胞中的浓度不会降低，因此与阻遏物以及变构酶的结合是不可逆的。这就使得有关的酶不可逆地停止了合成，或是酶的催化作用不可逆地被抑制。 正亮氨酸积累机制 正亮氨酸积累机制 正亮氨酸积累机制 L-异亮氨酸生产 方法：提取法、化学合成法、发酵法 发酵法：添加前体发酵、直接发酵法 直接发酵法：借助微生物具有合成自身所需氨基酸 的能力，通过菌株的诱变处理，选育出各种营养缺陷型和氨基酸结构类似物抗性突变株，如黄色短杆菌，以解除代谢调节中的反馈抑制和反馈阻遏，达到过量积累L-Ile的目的。 L-异亮氨酸生产 L-异亮氨酸生产 这是一个正亮氨酸积累机制。 这是异亮氨酸的生物合成和代谢调节示意图，在它生物合成的主代谢流中，有五个关键酶控制其强度，第一个是PC，第介于合成和代谢分解代谢物上的第一个酶，受天冬氨酸的反馈抑制，受天冬氨酸和谷氨酸的反馈阻遏。第二个是AK，受苏氨酸和赖氨酸的协同反馈抑制。通过选育赖氨酸营养缺陷型阻断由天冬氨酸半缩醛向赖氨酸的合成途径，使代谢流更加畅通，积累中间代谢产物苏氨酸，最终积累L-异亮氨酸。第三个是HD，受苏氨酸的反馈抑制和蛋氨酸的反馈阻遏。通过选育苏氨酸结果类似物，蛋氨酸结构类似物，或者是蛋氨酸缺陷型菌株可活化该酶。第4个是TD，是第一个限速酶，受异亮氨酸的反馈抑制。筛选异亮氨酸结构类似物的抗性突变株，可以遗传性地解除异亮氨酸的反馈抑制。第五个是AS。是第二个限速酶，受缬氨酸的反馈抑制，以及缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的多价反馈阻遏。筛选缬氨酸结构类似物抗性菌株可活化该酶。 微生物代谢调控内容 由Leu产生菌诱导了Ile、Val生物合成酶系有缺陷的突变株，在Thr的培养基中发酵，结果Thr转化成α-KB，不去合成Ile，却积累了Nva，同时副生Nle。 Nle是由Nva前体物α-KV经Leu生物合成系生成的。 Nle来自Nva，是Met生物合成的假反馈控制剂，添加Met，可回复生长，积累Nle。 通过选育自我抗性，即赋予Nle抗性，可以育出在不添加Me