短发卡状RNA抑制人Bubl基因表达及其对人卵巢癌A2780细胞药物敏感性与周期的影响.pdfVIP

中国癌症杂志 2010年第20卷第3期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2010 Vol.20 No.3 161 短发卡状RNA抑制人Bub1基因表达及 其对人卵巢癌A2780细胞药物敏感性和 周期的影响 周婷　翁丹卉　王世宣　卢运萍　马丁 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科，湖北 武汉 430030 　　［摘要］　背景与目的： 既往研究提示，紫杉醇类药物作用的发挥有赖于功能完整的纺锤体检查点， 而Bub1是纺锤体检查点的重要组成部分。本研究旨在探讨Bub1短发卡状RNA真核表达载体稳定转染对人卵巢 癌A2780细胞紫杉醇敏感性及细胞周期的影响。方法：构建Bub1基因短发卡状RNA真核表达载体pEGFP-Bub1- shRNA，以脂质体LipofectamineTM 2000包裹空质粒转染体外培养的人卵巢癌细胞株A2780后进行稳定筛选。应 用RT-PCR、Western印迹法分析目的基因mRNA及其蛋白水平的表达情况；MTT法、流式细胞术等方法检测转染前 后，A2780细胞对紫杉醇敏感性及其细胞周期的变化；Hoechst33342染色法检测细胞分裂指数。结果：与对照 组pEGFP-C1/A2780及A2780组相比，pEGFP-Bub1-ShRNA/A2780组细胞中mRNA和蛋白水平的表达均明显下降，其 P 差异具有统计学意义（ 0.05）；MTT检测结果提示，转染pEGFP-Bub1-shRNA质粒后细胞对紫杉醇的敏感性明 P 显降低，与对照组相比，差异具有统计学意义（ 0.05）；流式细胞术检测结果显示，紫杉醇1 μmol/L处理 P /M期细胞比例下 细胞24及48 h后,与pEGFP-C1/A2780及A2780组相比，该组细胞凋亡率明显降低（ 0.05），G2 P 降，差异具有统计学意义（ 0.05）；Hoechst33342染色提示，与对照组相比，pEGFP-Bub1-shRNA/A2780组的 P 分裂指数（MI）明显降低，差异具有统计学意义（ 0.05）。结论：Bub1基因的下调可导致人卵巢癌A2780细 胞对紫杉醇敏感性及G2/M期细胞比例下降。pEGFP-C1-shBub1质粒的成功构建，为研究Bub1基因的功能及定位 的研究提供了进一步的实验条件。 　　［关键词］　卵巢癌；　Bub1基因；　紫杉醇；　耐药 　　中图分类号：R73-36+1　　文献标识码：A　　文章编号：1007-3639(2010)03-0161-06 Effects of pEGFP-Bub1-shRNA plasmid on cell cycle and paclitaxel -sensitivity in human ovarian cancer ceIl line A2780   ZHOU Ting,WENG Dan-hui,WANG Shi-xuan,LU Yun-ping,MA Ding  (Department of Department of Obstetrics and Gynecology, Tongji Hospital, Tongji Medical  College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan Hubei, 430030, China) Correspondence to：WANG Shi-xuan　E-mail：sxwan