基于抗体等重组蛋白表达产品哺乳动物细胞大规模发酵技术.pdfVIP

中国医药生物技术 2009 年 10 月第 4 卷第 5 期 Chin Med Biotechnol, October 2009, Vol. 4, No. 5 325 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.05.001 ·述评· 基于抗体等重组蛋白表达产品的 哺乳动物细胞大规模发酵技术 陈志南，杨向民 抗体等重组蛋白产品是以基因工程和细胞工 获得各类细胞包括 CHO 、BHK 、HEK293 、Vero 、 程为关键技术的生物技术产品，其特异性高、均 Per C6 、SP2/0、NSO 等多种细胞系的化学计量变 一性好、靶点明确，广泛应用于各类重大疾病、尤 化模式，如 OUR/GLU 的相关关系可以用来监测 其是对肿瘤治疗[1-2]。目前，在 FDA 批准的 32 种 和控制哺乳动物细胞的培养过程，在线监测氧气摄 抗体药物治疗疾病的分类中，肿瘤类疾病占 32% 、 入速率可以估算细胞生长密度，确定合适的补料时 免疫性疾病占 37% 、器官移植疾病占 11% 、感染 间，对抗体等重组蛋白的细胞生产具有重要的指导 性疾病占 8% 、心血管疾病占 4% 、其他疾病占 意义。 6%。处于临床前及临床 I 、II 、III 期研究与开发的 在上述细胞生长、代谢与产物分泌的动力学参 各类生物技术药物中，抗体药物品种数量位居前 数及其化学计量关系的基础上，建立适合于该细胞 列，约 500 多种；正在进行临床试验的抗体药物 发酵模式的计算机自动化控制模型，并利用此模型 有 120 余种；但目前受工艺制约，多数抗体药物 及时分析处理细胞发酵的各种参数，从而实现对细 的产量不高。基于抗体等重组蛋白产品的动物细胞 胞发酵系统的反馈控制。例如，第四军医大学在研 高密度连续发酵工艺的不断涌现，必将促使抗体药 制优化 cHAb18/SP2/0 工程细胞无血清培养基的 物的产量突破成为现实，同时拉动生物制药产业的 基础上，结合程控反馈补料系统精确控制葡萄糖和 快速增长。 谷氨酰胺水平，使工艺过程中代谢产物乳酸和氨的 动物细胞大规模发酵技术是从动物体内分离 浓度分别控制在 5 mmol/L 和 1.5 mmol/L 以下， 细胞，模拟体内的生理环境，在无菌、恒温和均一 葡萄糖和谷氨酰胺对乳酸和氨的得率均降低至 的营养介质下，使离体细胞生长并保持一定结构和 1.0 mmol/L 以下。 功能、实现表达产物稳定分泌的一项工业化技术。 在工业化生物制品生产的动物细胞培养中，如 工程细胞主要有 CHO 、BHK 、HEK293 、Vero 、Per 何保持工艺的稳定性和产品的一致性至关重要。因 C6 、SP2/0、MAGE1.5 等，其发酵技术至少有 70% 此，建立多参数系统控制方法实现工艺放大及批次 是采用搅拌式生物反应器连续悬浮培养形式，50% 间过程参数的一致性是保证生产过程和产品质量 以上采用无血清、无蛋白培养；目前，用于诊断和 一致性的前提。以往的动物细胞培养工艺研究，主 研究工具产品单抗占据很大的品种比例，而用于治 要强调细胞生长和抗体分泌的数量，以所到达的 疗的单抗虽种类较少，但需求量很大，全球每年约 细胞密度、获得目标产品的产量为主要考核指标， 需要 6000 kg ，这就要求我们考虑开展多种生产方 而忽视培养过程参数的稳定性、一致性的研究， 式和进一步扩大生产规模来提高抗体产量。 尤其是培养过程参数对于产品质量、稳定性和生 物学效应的研究不够重视。例如，采用统计学方 1 细胞发酵过程的多参数控制与过程质量 法确定培养工艺过程中影