猪源TTV论文：猪源TTVORF荧光定量PCR多克隆抗体.docVIP

猪源TTV论文：猪源TTV转录本的鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立 【中文摘要】TTV(Torque teno virus)属于环病毒科指环病毒属成员,为单股、环状、负链的DNA病毒,正20面体对称结构,无囊膜。人源TTV基因组大小约为3900bp,猪源TTV约2700bp。到目前为止,尚未发现猪源TTV与任何一种猪病有必然联系,但是与一些猪病的发生有一定的相关性,如断奶猪多系统衰竭综合症、猪皮炎肾炎综合症等,因此,研究猪源TTV对于预防其潜在的致病性有重要意义。1、由于还没有找到适合在体外培养TTV的细胞系,其基因组结构及复制转录机制尚不清楚。本研究利用本实验室构建的含有TTV2基因组三种不同拷贝数的质粒pSK+1TTV2(含有1个TTV2基因组拷贝的pSK载体)、pSK+1.3TTV2(含有1.3个TTV2基因组拷贝的pSK载体)、pSK+2TTV2(含有2个TTV2基因组拷贝的pSK载体),将其转染至张氏肝细胞,48小时后,提取总的RNA,用DpnI消化其中可能存在的DNA,然后利用预测的阅读框ORF1、ORF2、ORF3的扩增引物,确证其中的DNA已经消除干净。RNA经反转录后,用这三对引物扩增基因片段,经克隆和测序,结果发现:ORF1确实发生了转录,但转录产物并非O... 【英文摘要】TTV (Torque teno virus), a small, non-enveloped virus, has a single-stranded circular DNA genome and is currently classified into the family Anelloviridae. Viral DNA of both porcine TTV species (TTV1 and TTV2) has a high prevalence in both healthy ans diseased pigs worldwide and multiple infection of porcine TTV species with distinct genotypes or subtypes of the same species has been documented in China. Human TTV genome has 3900bp and porcine TTV 2700bp. So far, no porcine diseases have been found a reason... 【关键词】猪源TTV ORF 荧光定量PCR 多克隆抗体 【英文关键词】porcine TTV ORF fluorescence quantitative PCR polyclonal antibody 【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发 【目录】猪源TTV转录本的鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立 摘要 6-8 Abstract 8-9 第一章 绪论 17-29 1.1 TTV 的发现及概况 17-19 1.2 人TTV 的研究进展 19-25 1.2.1 人TTV 流行情况的调查 19 1.2.2 人TTV 的分子生物学特征 19-24 1.2.3 人TTV 的致病性 24 1.2.4 人TTV 感染的诊断 24-25 1.3 猪源TTV 研究现状 25-27 1.3.1 猪源TTV 的流行病学调查 25 1.3.2 猪源TTV 的基因型 25-26 1.3.3 猪源TTV 的分子生物学特征 26 1.3.4 猪源TTV 的致病性 26-27 1.3.5 猪源TTV 的检测方法 27 1.3.6 TTV 研究的前景展望 27 1.4 目的和意义 27-29 第二章 猪源TTV 转录本的鉴定 29-47 2.1 材料与方法 29-37 2.1.1 质粒、菌株和细胞 29 2.1.2 试验试剂和主要仪器设备 29-30 2.1.3 CaCl_2 法制备大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞 30 2.1.4 阳性质粒转化至DH5α感受态细胞 30 2.1.5 小量制备阳性质粒 30-31 2.1.6 阳性质粒的酶切鉴定 31 2.1.7 大量制备阳性质粒 31-33 2.1.8 阳性质粒转染至张氏肝细胞系 33-34 2.1.9 提取总RNA 34-35 2.1.10 总RNA 中残余DNA 的检测 35 2.1.11 反转录 35-36 2.1.12 PCR 扩增目的基因片段 36 2.1.13 PCR 产物的回收 36-37 2.1.14 目的基因片段的克隆与测序 37 2.2 结果 37-45 2.2.1 含TTV2 F